RNAi沉默Survivin基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuezhiyaodao
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目的初步探讨用RNAi沉默survivin基因对膀胱癌T24细胞增殖和调亡的影响。方法扩增并鉴定重组质粒;实验分为空白对照组,阴性对照组和实验组,将重组质粒(pTZU6+1-shRNA-survivin)、阴性质粒分别转染至膀胱癌T24细胞,用RT-PCR检测T24细胞survivin基因表达的变化;用MTT法观察T24细胞增殖抑制率;用AO/EB荧光染色检测和膜联蛋白V-PI(annexinV/PI)染色流式细胞技术检测T24细胞调亡的情况;用透射电镜观察T24细胞形态的改变。结果酶切及测序鉴定结果表明:重组质粒目的片段插入正确; RT-PCR实验显示:转染pTZU6+1-shRNA-survivin 24h后,实验组T24细胞survivin基因的表达受到显著抑制,抑制率为41.77%,与阴性对照组相比有差异显著性,(P<0.05);MTT实验显示:转染48h后,实验组T24细胞增殖抑制率达到最高,为52.53%,与空白对照组及阴性对照组相比有差异显著性,(P<0.05);annexinV/PI染色法流式细胞术显示:转染24h后,实验组T24细胞凋亡率为(16.76±1.31)%,与空白对照组及阴性对照组相比有差异显著性,(P<0.05);转染24h后,实验组透射电镜观察可见各期凋亡细胞及凋亡小体,阴性对照组无明显改变。结论转染pTZU6+1-shRNA-survivin可以显著下调survivin基因的表达,并可以显著抑制T24细胞增殖并诱导其自发凋亡。RNAi技术有可能应用于膀胱癌的治疗。
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