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[目的]戊型肝炎是由戊型肝炎病毒引起的经消化道传播的急性自限性疾病,以往通常发生于卫生条件落后的发展中国家和落后国家,我国是高发地区之一。但是,近年来在一些发达国家如美国、欧洲等地陆续报道了非输入性戊型肝炎的发生,另外,有证据显示戊型肝炎还可以引起人畜共患性疾病,而且在孕妇死亡率可高达20-30%,对社会造成了极大的危害,因此戊型肝炎越来越受到人们的重视。迄今为止,尚无有效的HEV感染的细胞模型和动物模型,因此其感染和发病机制尚不清楚,而且也没有建立统一的诊断标准、分级标准和广泛认可的诊断试剂。本课题旨在通过临床大样本戊型肝炎病例的研究,建立戊型肝炎死亡的预报模型和新的诊断方法,并未后续研究提供临床依据和线索。[方法]1.收集2007-2008年湖北武汉同济医院和传染病院戊型肝炎患者共计210例,所有患者均采集系列血清进行HEV RNA、血清学和生化学指标的检测,随访半年。将存活组与死亡组进行组间比较,对有意义的指标进行单因素和多因素Logistic回归分析,筛选出戊型肝炎患者死亡的危险因素,建立戊型肝炎患者死亡概率的预报模型,并进行评估。2.利用来源于基因Ⅰ型戊型肝炎病毒开放读码框2,并可形成多聚体形式的p239抗原,建立抗HEV-IgA检测的间接酶联免疫吸附诊断试剂盒。利用ROC曲线法确定临界值。然后以2210份临床排除急性戊型肝炎病毒感染血清作为阴性血清盘,245位临床诊断戊型肝炎患者系列血清作为阳性血清盘,评估试剂盒的特异度、灵敏度和临床应用价值。3.构建基因Ⅰ型和Ⅳ型戊型肝炎病毒完整的开放读码框3的真核表达质粒,激光共聚焦显微镜观察ORF3的细胞内定位。MTT法检测其对两个基因型的戊型肝炎病毒ORF3基因对HepG2细胞增殖的影响,对抗放线菌素D损伤细胞的作用,western blotting检测其对HepG2细胞核内NF-κB表达的影响。[结果]1.湖北地区散发性戊型肝炎均为基因Ⅳ型戊型肝炎病毒感染,总病死率为10%(21／210)。男性多发(85.2%),中老年多见：全年均可见到发病,但是以第一季度为高发季节,占到了全年总发病数的50.5%。血清总胆红素(OR值=1.0009,每1μmol/L)、血尿素氮(OR值=1.178,每1mmol/L)和国际标准化比值(OR值=9.216,每1)为戊型肝炎患者死亡的主要危险因素。建立了戊型肝炎患者死亡概率的预报模型,从起病第二周即能较好的预测患者的临床转归,曲线下面积达0.957。2.利用P239抗原成功构建了检测抗HEV-IgA的间接ELISA试剂盒,特异度达到了99.6%(95%置信区间：99.2%-99.8%)。在245例临床诊断戊型肝炎的患者,有84例患者血清中检出HEV RNA。在此84例HEV RNA作为金标准的患者中,抗HEV-IgA、抗HEV-IgM和抗HEV-IgG的阳性率分别为96.3%(81／84)(95%置信区间：89.8%～98.8%)、97.6%(82／84)(95%置信区间：91.7%～99.3%)和88.1%(74／84)(95%置信区间：79.5%～93.4%),并且没有样本抗HEV-IgA和抗HEV-IgM同时阴性的。在245例戊型肝炎患者中,发现9份分别来自于9例患者的血清样本在急性期内存在抗HEV-IgM阴性的时期,但是9份样本抗HEV-IgA均为阳性,其中两例检出HEV RNA。3.成功构建了基因Ⅰ型和Ⅳ型HEV ORF3的真核表达质粒,测序证实构建成功,并能够在转染的HepG2细胞成功表达。激光共聚焦显示HEV ORF3蛋白主要定位与细胞浆内而不能进入细胞核。MTT检测发现基因Ⅰ型和Ⅳ型HEV ORF3基因在正常情况下对HepG2细胞的增殖没有影响,而在放线菌素D处理的HepG2细胞中则能够表现出显著促进存活的作用,且在两个基因型HEV ORF3之间没有显著性差异。Western blotting显示HEV ORF3能够促进HepG2细胞核内P65的表达,且在两个基因型HEV ORF3之间没有显著性差异。【结论】1.武汉地区戊型肝炎仅见基因Ⅳ型HEV感染,HE患者中男性比例高于女性,中老年人为主,第一季度即冬春季为散发性戊型肝炎的高发季节。血清总胆红素、血尿素氮和国际标准化比值是戊型肝炎患者死亡的主要危险因素,初步构建了戊型肝炎患者死亡概率的预报模型,预测价值较好。2.成功构建抗HEV-IgA间接ELISA检测试剂盒,其特异度和在基因Ⅳ型HEV感染患者中的灵敏度均较好,联合抗HEV-IgM检测可使戊型肝炎患者诊断的特异度和灵敏度均达到100%,有助于提高临床上对戊型肝炎诊断的准确度。3.基因Ⅰ型和Ⅳ型HEV ORF3均定位于细胞胞浆中,对于放线菌素D处理的HepG2细胞具有保护作用,并有可能是通过激活NFκB通路而产生作用的。