【摘 要】
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实验一:SB431542对牙周膜干细胞体外增殖及成骨分化的影响实验目的:探究TGF-β信号通路抑制剂SB431542在体外对人牙周膜间充质干细胞(hPDLSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:1.取临床正畸减数拔牙的废弃牙行原代细胞培养,扩增,形成hPDLSCs。2.采用流式细胞术检测第2代hPDLSCs表面标记物CD73、CD90、CD34、CD45的表达。将常规培养基设为空白组,成骨诱导培养
【基金项目】
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基于诱导多能干细胞巨颌症人类细胞动物模型的建立与治疗系统的开发,国家自然科学基金,基金号:81200770; 利用牙源性干细胞来源的诱导多能干细胞进行牙齿再生的研究,留学回国人员择优资助项目,基金号:20143003;
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实验一:SB431542对牙周膜干细胞体外增殖及成骨分化的影响实验目的:探究TGF-β信号通路抑制剂SB431542在体外对人牙周膜间充质干细胞(hPDLSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:1.取临床正畸减数拔牙的废弃牙行原代细胞培养,扩增,形成hPDLSCs。2.采用流式细胞术检测第2代hPDLSCs表面标记物CD73、CD90、CD34、CD45的表达。将常规培养基设为空白组,成骨诱导培养基设为对照组,加SB431542的成骨诱导培养基设为实验组。3.用CCK8试剂盒检测hPDLSCs的增殖能力,绘制增殖曲线。4.RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)检测各成骨相关基因(OCN、OPN、ALP、COLLEGE1)的表达。5.成骨培养21天后用茜素红染色显示矿化结节形成情况。结果:原代培养的hPDLSCs流式细胞术表面标记物表达CD73(94.49%)、CD90(98.74%)、CD34(2.07%)、CD45(0.62%);实验组在各检测点的细胞增殖能力(OD值)均高于对照组(P>0.05);实验组成骨分化相关基因的表达水平升高(P<0.05),细胞染色见矿化结节增多增大。结论:1μMSB431542可提高hPDLSCs体外成骨分化能力,但对增殖无明显影响。本研究为骨再生临床转化医学提供了新思路。实验二 SB431542对牙龈干细胞体外增殖及成骨分化的影响实验目的:选用TGF-β信号通路抑制剂SB431542为实验用小分子药物,通过对SB431542在体外对人牙龈间充质干细胞(hGMSCs)增殖及成骨分化能力的研究,探究其转化骨再生的能力。方法:1.取口腔种植治疗年轻患者二期手术切取的牙龈行原代细胞培养,传代扩增细胞量形成hGMSCs。2.通过流式细胞术检测第2代hGMSCs表面标记物CD73、CD90、CD34、CD45的表达,确定hGMSCs。将常规培养基设为空白组,成骨诱导培养基设为对照组,加SB431542的成骨诱导培养基设为实验组。3.用CCK8试剂盒检测hGMSCs的增殖能力,绘制增殖曲线。4.RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)检测各成骨相关基因(OCN、OPN、ALP、COLLEGE1)的表达。5.成骨培养21日后戊二醛固定,用茜素红染色显示矿化结节形成情况。结果:原代培养的hGMSCs流式细胞术表面标记物表达CD73(96.5%)、CD90(98.63%)、CD34(2.47%)、CD45(0.87%);实验组在各检测点的细胞增殖能力(OD值)均高于对照组(P>0.05);实验组成骨分化相关基因的表达水平升高(P<0.05),细胞染色见hGMSCs实验组矿化结节增多增大明显。结论:小分子药物TGF-β信号通路抑制剂1μMSB431542可明显提高hGMSCs体外成骨分化能力,但对增殖无明显影响。本研究为骨再生临床转化医学提供了新的指向靶点。
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