【摘 要】
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猪肠道病毒引起的腹泻类疾病是猪的常见病,可引起各年龄段猪只发生腹泻、脱水、消瘦等,临床症状相似难以区分,造成仔猪的高发病率和高死亡率给养猪业带来了严重的经济损失。其中,PEDV是危害养猪业最主要的疾病之一,且变异株在田间广泛流行,需对PEDV的分子结构特征和遗传变异特性进行更为深入的了解。1、猪肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用本研究成功建立了能同时、快速检测PEDV、TGEV、PDCo
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猪肠道病毒引起的腹泻类疾病是猪的常见病,可引起各年龄段猪只发生腹泻、脱水、消瘦等,临床症状相似难以区分,造成仔猪的高发病率和高死亡率给养猪业带来了严重的经济损失。其中,PEDV是危害养猪业最主要的疾病之一,且变异株在田间广泛流行,需对PEDV的分子结构特征和遗传变异特性进行更为深入的了解。1、猪肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用本研究成功建立了能同时、快速检测PEDV、TGEV、PDCo V、PRo V和PKV五种猪肠道病毒的多重RT-PCR方法,检测的样品最低限为7.56×10~1copies/μL,该方法特异性强、敏感性好、重复性高。应用该方法,试验对2017-2018年广西不同地区的171份样品进行了PEDV、TGEV、PDCo V、PRo V和PKV流行病学调查,阳性率分别为64.91%、19.30%、8.77%、12.87%、63.74%。分析发现,广西地区猪肠道病毒多呈混合感染（60.82%）。其中,PEDV和PKV混合感染阳性率最高（30.41%）,PEDV、TGEV和PKV混合感染阳性率次之（10.53%）。2、猪流行性腹泻17GXCZ-1毒株全基因组分析本研究成功获得实验室分离株17GXCZ-1全基因组序列,全长共28035bp,5’UTR、ORF1、S、ORF3、E、M、N、3’UTR各段基因大小分别为292、20345、4158、675、231、681、1326、334bp。17GXCZ-1毒株与参考毒株的全基因核苷酸同源性为96.3～98.2%;与参考毒株的S基因核苷酸和氨基酸同源性分别为93.4～98.1%和92.8～98.7%,与参考毒株的ORF3基因核苷酸和氨基酸同源性分别为95.3～99.6%和89.0～100.0%。根据遗传演化分析显示,17GXCZ-1为G2-a型变异株,并与AJ1102株亲缘关系最密切。通过生物软件,针对17GXCZ-1 S和ORF3蛋白跨膜区组成、疏水性最大及最小值、信号肽切割位点和潜在N-糖基化位点的预测结果与AJ1102毒株相同。综上所述,本研究不仅为猪肠道病毒的鉴别诊断和混合感染的监测提供了科学有效的检测方法,而且为临床应用提供了有效的技术保证,还对广西地区PEDV流行毒株的遗传进化进行了深入分析,为进一步对PEDV毒株感染性克隆的研究奠定了坚实的基础。
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