论文部分内容阅读
目的： 本研究应用流式细胞术检测再生障碍性贫血(Aplastic anemia，AA)患者外周血中性粒细胞膜碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase expression on the membrane of neutrophils，mNAP)的表达，探讨其在AA诊断中的价值及mNAP升高的潜在机制。 方法： 1.收集2014年8月至2015年12月连云港市第一人民医院收治初诊全血细胞减少患者198例，所有入选患者的血常规均符合：Hb<100g/L、RBC<3.5×1012/L、WBC<4.0×109/L、PLT<100×109/L。经临床症状体征、实验室检查、骨髓细胞学检查及病理诊断确诊为AA患者52例，非AA导致全血细胞减少患者146例作为疾病对照组。健康对照组100例来自健康体检者。采集所选标本乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血2ml，流式检测中性粒细胞mNAP,结果以每个细胞结合的抗体数(antibodies bound per cell，AB/c)表示。比较组间差异。 2.用流式检测AA组外周血mNAP表达水平，采用受试者工作特征(Receiver operating characteristic，ROC)曲线评价mNAP对AA的诊断价值。 3. ELISA法检测各组别血清中粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）浓度，比较并分析各组间差异。 4.体外分离中性粒细胞，并与G-CSF共培养，流式细胞术检测中性粒细胞膜NAP的表达，观察G-CSF对NAP表达的诱导作用。 5.统计学处理采用SPSS17.0软件，正态分布计量数据采用(_χ± s)表示，组间比较采用方差分析，偏态分布数据以M(P25～P75)表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。ROC曲线评价mNAP对AA的诊断效能。以P<0.05为差异有统计学意义。 结果： 1.AA、非AA疾病对照组和健康对照组mNAP检测结果M(P25～P75)分别为13931(11128–21605) AB/c、1875(1119–3119)AB/c、1831(1371–2411)AB/c，三组患者 mNAP表达差异有统计学意义(P<0.01)。AA组mNAP表达显著高于非AA组及健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。非AA疾病对照组与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。 2.ROC曲线分析结果表明，mNAP诊断AA的ROC曲线下面积为0.95，在最佳切点6388 AB/c时，mNAP诊断敏感性为90.90％(95%CI0.83-0.96)、特异性为96.10%(95%CI0.86-0.99)，拟然比23.2。阳性预测值（PPV）88.7%、阴性预测值（NPV）99.5%。 3.AA组、疾病对照组和健康对照组血清G-CSF浓度（_χ± s）为467.74±186.10 pg/ml、110.23±86.00 pg/ml、63.65±38.71 pg/ml，AA组高于疾病对照组和健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；疾病对照组与健康对照组比较，差异无统计学意义。 4.用G-CSF培养体外分离出的中性粒细胞24小时后，流式检测中性粒细胞膜上NAP的表达。实验组即经过G-CSF培养后，mNAP值9200.00±1276.71 AB/c，对照组即未加G-CSF，mNAP值2106.67±280.06 AB/c，P<0.01，差异有统计学意义。 结论： 1.mNAP在AA患者中具有较高的特异性和敏感性，对AA辅助诊断具有重要的价值，有望成为诊断AA的辅助诊断生物标志物而广泛应用于临床。 2.G-CSF在AA患者中水平高于疾病对照组和健康组，差异有统计学意义。 3.G-CSF在体外可诱导中性粒细胞mNAP的表达，G-CSF与mNAP在AA中的高表达有一定关系。