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热休克蛋白90(Hsp90)是一种广泛存在于细胞中的分子伴侣(molecular chaperone)。它通过稳定肿瘤细胞中的原癌蛋白(例如Akt和c-Raf)从而参与多种细胞内信号转导过程。Hsp90抑制剂17-AAG在临床试验中展现出颇具希望的抗肿瘤效应,但由于其潜在的毒性和不良的药代特性,进一步的应用受到限制。因此现阶段的努力集中于开发具有更强药效和更低副作用的新型Hsp90抑制剂。本研究利用荧光偏振竞争结合实验筛选了百余种小分子化合物,并筛选出一种作用较强的间苯二酚衍生物LD053,它能与Hsp90ATP结合口袋有效地结合。LD053与Hsp90的结合能将辅分子伴侣cdc37从Hsp90上解离下来,导致Akt和c-Raf的不稳定,并通过提高泛素化而使两者降解,进而抑制下游的PI3K/Akt和c-Raf/Mek/Erk信号通路。结果,LD053降低了BGC8231中瘤细胞的活力并诱导其凋亡,表现为细胞在subGO/G1期的积累,同时cleaved-caspase3和PARP的增多。但正常细胞对LD053并不敏感。与体外抗肿瘤活性一致,LD053能显著抑制裸鼠体内BGC823异种移植瘤的生长,而体重却未见明显降低。以上结果均表明,LD053是一种新型的Hsp90抑制剂,并具有潜力用于胃癌的治疗。近期研究表明,由eIF4F复合物起始的帽依赖的翻译过程对多种原癌蛋白的表达是必需的,这些原癌蛋白包括c-Myc, survivin, Cyclin D1, Mcl-1, VEGF等。因此帽依赖的翻译在人类肿瘤中常常是处于上调的状态。作为eIF4F复合物的重要组成部分,真核生物翻译起始因子4E (eIF4E)是帽依赖翻译的限速因子,并且经常因为基因扩增和转录上调而在肿瘤细胞中过表达。siRNA或反义寡核苷酸引起的eIF4E的表达下调能够有效地抑制肿瘤细胞的生长并诱导凋亡,而且没有明显毒性。这些结果使研究者们对开发新型的小分子药物产生了浓厚的兴趣,这些小分子药物能靶向于eIF4E区动的翻译起始装置。基于FRT介导的同源重组,本实验室建立了一种基于荧光素酶报告体的检测方法,能够高通量地筛选抑制eIF4E表达的小分子化合物。应用该方法我们筛选了NCI Diversity-Set化合物库,筛选出一个小分子,代号为48F10,它能在较低的微摩尔浓度显著地抑制几种乳腺癌细胞eIF4E的mRNA表达,进而剂量和时间依赖性地降低HS578T细胞中eIF4E的蛋白水平,导致下游蛋白survivin, cyclin D1, Mcl-1和c-myc的下调,同时抑制乳腺癌细胞的生长,并诱导凋亡,表现为cleaved-caspase3和cleaved-PARP的明显增多。因此,48F10代表了一类新的eIF4E抑制剂,能通过抑制eIF4E的转录而抑制帽依赖的翻译。