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Mef2C(肌细胞增强因子C)作为一种肌肉发育相关因子于1993年发现,该基因在演化上十分保守,是多种胞内信号通路调控成肌细胞分化的终端。目前对于影响它的上游信号和下游目标基因方面的研究较多,且集中于肌细胞和神经细胞中,而肌细胞中的研究主要针对Mef2C与其它肌细胞特异性因子的相互作用和影响。Adiponectin (旨联素)是近年来发现的脂肪细胞因子,在脂肪、肌肉等组织中广谱表达,并通过自分泌,旁分泌及内分泌作用于靶细胞。脂联素首先作为一种胰岛素增敏激素(Insulin-sensitizing Hormone)被发现,后来证实它具有抗动脉粥样硬化的功能。脂联素拥有两个受体,AdipoR1(脂联素受体1)和AdipoR2(脂联素受体2),肌细胞中主要表达AdipoR1。近年来有报道表明脂联素可以促进成肌分化过程,但典型的成肌因子Mef2C与脂联素及其受体信号途径的关系,即Mef2C如何通过脂联素信号途径影响成肌分化目前尚不清楚。本文通过Real-Time PCR,双荧光素酶,Western Blot等研究方法研究了小鼠成肌细胞分化过程中脂联素及其受体信号分子的表达差异,及Mef2C通过对脂联素受体信号途径对成肌分化的影响,结果如下：1. 以C2C12成肌细胞为模型,Real-Time PCR检测脂联素及其受体1的mRNA表达量；Western Blot检测脂联素及其受体1蛋白水平的表达；发现分化后脂联素及其受体1的mRNA和蛋白水平表达量均增加。2. 构建稳转脂联素的C2C12细胞株,Real-Time PCR检测mRNA水平MHC(肌球蛋白重链)表达量的变化；免疫组化检测MHC蛋白水平表达量的变化：发现mRNA水平MHC表达量均增加,免疫组化镜检发现稳转脂联素的C2C12相比对照组形成了更多肌管。为进一步证实脂联素促分化的作用,从C57/B16小鼠骨骼肌中分离出原代成肌细胞,用2ug/ml的脂联素重组蛋白处理, MHC免疫组化发现脂联素处理的成肌细胞有明显的肌管形成。3. 为阐明Mef2C在脂联素及其受体信号通路中的作用,构建了一株稳转Mef2C的C2C12。Real-Time PCR 和 Western Blot检测发现稳转Mef2C的C2C12细胞中脂联素和脂联素受体1的mRNA水平和蛋白质水平表达量均增加。4. 对脂联素启动子和脂联素受体1启动子序列进行转录因子结合位点预测,发现存在MEF2C的结合位点,为了探知MEF2C是否可以直接作用于脂联素和脂联素受体1的启动子,构建了脂联素启动子和受体1启动子的pGL3载体和Mef2C的表达载体,共同转染C2C12,发现Mef2C仅对脂联素受体1有直接调控作用。ChIP(染色质免疫共沉淀)实验证实Mef2C可以与脂联素受体1启动子上的MEF2结合位点结合。5. 用Mef2C表达载体瞬时转染C2C12,Real-Time PCR检测APPL1(接头蛋白1)和GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)的表达水平,发现二者均上调。Western Blot检测p-AMPK 和 AMPK (AMP激活蛋白激酶),发现AMPK的磷酸化水平上调。反向实验采用脂联素受体1的抗体封闭C2C12表面的受体,teal-Time PCR检测MHC的表达量变化,发现转染Mef2C后封闭受体1会使MHC表达量减少。而用受体1的siRNA(小干扰RNA)敲减受体1后发现MHC的表达量也减少。以上结果说明Mef2C对脂联素受体1的调控会影响脂联素下游信号通路,进而影响成肌分化。