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目的:明确Zeste基因增强子同源物2(Enhancer of zeste homolog 2,Ezh2)在原发性肝癌化疗多药耐药中的作用,探讨其可能的作用机制。方法:1.采用RT-PCR和Western blot检测MDR-1及其编码的P-GP蛋白在肝细胞和肝癌细胞,肝癌组织和癌旁组织中的表达,并结合患者的临床病理学资料和影像学资料,筛选耐药细胞株和耐药组织以进行后续实验。2.采用免疫组化、RT-PCR及Western blot等方法检测Ezh2在肝细胞和肝癌细胞,肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中的表达情况,结合患者的临床病理学资料和TACE疗效进行统计分析,探讨Ezh2的表达水平与临床病理因素、TACE疗效以及患者预后的关系。3.使用Ezh2-siRNA转染处于对数生长期的Bel/Fu肝癌耐药细胞株24 h后,采用RT-PCR及Western blot检测Ezh2mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期,Annexin V-APC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测CyclinD1、CDK4等细胞周期蛋白表达水平的改变,划痕实验和Transwell实验检测Bel/Fu细胞的迁移能力和侵袭能力的改变。4.Ezh2-siRNA转染Bel/Fu细胞24 h后,采用RT-PCR及Western blot检测MDR1 mRNA和P-GP在肝癌耐药细胞株Bel/Fu中表达水平,Western blot检测ERK、JNK、p38-MAPK等MAPK通路蛋白的表达水平及磷酸化水平,CCK-8法检测Bel/Fu细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的敏感性,并用Annexin V-APC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:1.在mRNA水平和蛋白质水平,MDR1(P-GP)在肝癌组织和肝癌细胞株中各自的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)和正常肝细胞株(P<0.01);P-GP在耐药组中的相对表达水平明显高于非耐药组(P<0.05)。2.在mRNA水平和蛋白质水平,Ezh2在肝癌组织和肝癌细胞株中呈过表达(P<0.05),并且在耐药组织和耐药细胞株中表达水平更高(P<0.05);Ezh2的表达水平与P-GP的表达水平,肿瘤的分化程度、TACE疗效以及临床预后存在相关性(P<0.05)。3.沉默Ezh2后,与阴性寡核苷酸对照组和空白对照组相比,Ezh2-siRNA组的细胞增殖能力明显下降(P<0.01),在G1/S期发生周期阻滞(P<0.01),周期蛋白CyclinD1、CDK4表达水平下降(P<0.05),P15和P21水平升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.01),迁移、侵袭能力下降(P<0.05)。4.沉默Ezh2后,MDR1在肝癌耐药细胞株Bel/Fu中,无论mRNA水平,还是蛋白水平的表达均明显下调(P<0.05),ERK和JNK蛋白表达水平和磷酸化水平明显下降(P<0.05),而p38-MAPK的表达和磷酸化水平无明显变化(P>0.05);Ezh2-siRNA+5-Fu复合组、纯Ezh2-siRNA组和纯5-Fu组细胞生长抑制率分别为36.24%±3.62、24.93%±2.49、13.32%±1.33,并且复合组凋亡率明显高于纯Ezh2-siRNA组(P<0.01)和纯5-Fu组(P<0.01)。结论:1.Ezh2在肝癌中过表达,其表达水平与肿瘤的分化程度、化疗耐药以及临床预后相关;2.Ezh2-siRNA转染人肝癌耐药细胞Bel/Fu沉默Ezh2后,可抑制肝癌耐药细胞Bel/Fu的增殖活性,可诱导其凋亡率升高,并导致细胞内细胞周期蛋白CyclinD1和CDK4水平降低,而P15和P21水平升高,继而引起细胞在G1/S期细胞发生周期阻滞;并且沉默Ezh2后可以降低Bel/Fu细胞的迁移能力和侵袭能力;3.采用Ezh2-siRNA转染人肝癌耐药细胞Bel/Fu后,可以下调MDR1(P-GP)的表达,逆转肝癌细胞的多药耐药性,这种作用可能是通过靶向调节MAPK通路的活性而实现的。