多菌灵对灰葡萄孢菌致病力低剂量刺激作用的研究

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灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)是一种死体营养型植物病原真菌,属于子囊菌门葡萄孢属。本论文研究了多菌灵对灰葡萄孢菌两株敏感菌株(HBtom536、HBtom459)和两株多菌灵抗性菌株(HBtom451、HBstr491)致病力的低剂量刺激作用。多菌灵对灰葡萄孢菌在黄瓜叶片上的致病力具有显著的低剂量刺激作用。叶面喷施多菌灵浓度为10μg/mL和50μg/mL时分别对抗性菌株HBtom451和HBstr491致病力的刺激率最高,为16.7%和13.5%;叶面喷施多菌灵浓度为0.02μg/mL和0.005μg/mL时分别对敏感菌株HBtom536和HBtom459致病力刺激率最高,为18.8%和12.5%。在含药的PDA上生长72 h后接种到黄瓜叶片上,PDA中多菌灵浓度在50μg/mL时对抗性菌株HBtom451和HBstr491致病力刺激率最高,分别为7.9%和9.5%;多菌灵浓度在0.02μg/mL和0.005μg/mL时分别对敏感菌株HBtom536和HBtom459致病力刺激率最高,为12.9%和9.1%。抗性菌株在含200μg/mL多菌灵的PDA上生长48 h作为预处理,接种到黄瓜叶片上,与未喷施药剂的对照相比,喷施多菌灵浓度为200μg/mL和400μg/mL时分别对抗性菌株HBtom451和HBstr491致病力的刺激率最高,为18.0%和27.4%;敏感菌株HBtom536和HBtom459分别在含0.05μg/mL和0.02μg/mL多菌灵的PDA上生长48 h作为预处理,接种到黄瓜叶片上,喷施多菌灵浓度为0.05μg/mL和0.02μg/mL时分别对敏感菌株HBtom536和HBtom459致病力的刺激率最高,为22.2%和17.2%。含低剂量多菌灵PDA可显著提高灰葡萄孢菌产生菌核的个数和干重。PDA中多菌灵浓度为50μg/mL时对抗性菌株HBtom451和HBstr491菌核数量和干重刺激率最高,对菌核数量最高刺激率分别为19.8%和26.6%,对菌核干重最高刺激率分别为10.3%和12.6%;对菌株HBstr491孢子萌发率刺激率为4.4%。PDA中多菌灵浓度为0.02μg/mL时对敏感菌株HBtom536菌核数量和干重的刺激率最高,分别为22.6%和20.8%;PDA中多菌灵浓度为0.005μg/mL时对敏感菌株HBtom459菌核数量和干重的刺激率最高,分别为19.7%和14.8%,对孢子萌发率刺激率为4.0%。在喷施50μg/mL多菌灵的黄瓜叶片上接种抗性菌株HBstr491,24 h后可观察到侵染病斑,而对照24 h时无明显病斑。扫描电镜观察显示,接种16 h后,处理组可观察到侵染垫结构,而未喷施多菌灵的对照侵染垫结构不明显,表明多菌灵对灰葡萄孢菌致病力的低剂量刺激作用在侵染的早期就表现出来,是一种直接刺激作用,而不是抑制后的过度补偿作用。对低剂量刺激作用生理生化及分子机制的研究表明,多菌灵对灰葡萄孢菌致病力的低剂量刺激作用与草酸的合成、漆酶活性和耐H2O2能力无关,与致病相关基因果胶甲酯酶基因Bcpme1、聚半乳糖醛酸酶基因Bcpg2、角质酶基因CutA、木聚糖酶基因Xyn11A和NADPH氧化酶基因BcnoxA的表达无关。在黄瓜叶片上同时喷施多菌灵和异菌脲,其浓度分别为3+0.0001μg/mL、10+0.0005μg/mL、50+0.0025μg/mL和200+0.0125μg/mL时,对多菌灵抗性菌株HBtom451和HBstr491致病力表现出低剂量刺激作用,最大刺激率分别为18.4%和22.8%。与喷施多菌灵和异菌脲单剂相比,同时喷施多菌灵和异菌脲的最大刺激幅度差异不大,但在最低浓度时,刺激幅度增加明显。与单剂相比,多菌灵和异菌脲混用对灰葡萄孢菌耐H2O2能力、细胞膜通透性、渗透压敏感性和胞外多糖含量的影响差异不显著。
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