【摘 要】
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近年来,越来越多的研究表明,小胶质细胞所介导的炎症反应,参与了包括抑郁症、自闭症等精神疾病,以及阿尔茨海默症、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病在内的各类疾病的发病过程,甚至扮演着关键角色。因此,对脑部炎症的及时检测对于预防和治疗各类疾病有着重要意义。目前大多数炎症检测手段只有当脑组织处于严重病理状态才能检测,同时检测试剂制备困难,制备成本高。因此,一种快速准确检测小胶质细胞活化引起的脑部
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近年来,越来越多的研究表明,小胶质细胞所介导的炎症反应,参与了包括抑郁症、自闭症等精神疾病,以及阿尔茨海默症、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病在内的各类疾病的发病过程,甚至扮演着关键角色。因此,对脑部炎症的及时检测对于预防和治疗各类疾病有着重要意义。目前大多数炎症检测手段只有当脑组织处于严重病理状态才能检测,同时检测试剂制备困难,制备成本高。因此,一种快速准确检测小胶质细胞活化引起的脑部炎症的方法是迫切需要的。本实验中,为了验证探针与ROS的发光成像反应,我们首先进行了体外实验。BV2细胞是一种小胶质细胞,在体外经LPS诱导活化后,产生ROS。我们分别用QCy7-H2O2和QCy7-HCl O两种探针转染活化的BV2细胞,均观察到了荧光成像,这说明探针对检测ROS的存在是有效的。然后我们又对探针转染B16F10细胞的时间进行了筛选,以确定转染后进行凋亡诱导的最佳时间,结果显示转染后30 min细胞内的荧光数量达到最大值。接下来,我们对包封了QCy7-H2O2探针的凋亡小体进行了粒径和形态的表征,结果显示包封前后凋亡小体的粒径分布以及TEM下的形态并无显著变化,这说明QCy7-H2O2探针的进入并未影响B16F10细胞的凋亡过程,也未对凋亡小体造成生理毒性。在体内实验中,我们首先通过脑室直接注射探针的实验证明了s ABs-QCy7-H2O2能够被大脑中的小胶质细胞吞噬并与ROS反应发光成像,并通过对照实验排除了探针在体内自发光的可能性;接下来我们尾静脉注射s ABs-QCy7-H2O2,成功观察到了脑部炎症区域的发光成像,实现了快速、准确、无创的体内炎症检测。最后,我们利用ZEISS LSM 980激光共聚焦显微镜对s ABs-QCy7-H2O2探针进入小胶质细胞的时间和空间特征进行了实时表征。综上所述,我们利用纳米级凋亡小体包载的QCy7-H2O2探针对脑部炎症实现了细胞水平上的检测,具有快速、灵敏、准确的优点。为脑炎检测提供了新的思路,也有望转化为有效的临床检测手段。
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