论文部分内容阅读
目的探讨小干扰RNA(short interference RNA,siRNA)沉默人胃癌细胞株AGS中的神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2,NRP-2)后,对胃癌细胞生物学行为的影响,为NRP-2能够成为胃癌治疗的新靶标提供一定的理论依据。方法严格规范培养人胃癌细胞株AGS;以脂质体Lip-2000为载体,将带有荧光的NRP-2的siRNA转染至AGS细胞株中,转染48小时后在荧光显微镜下检测其转染效率,若达60%以上即可认为转染成功,并记录转染配比。将本研究对象分为为三个不同组别:转染组:将沉默NRP-2的siRNA转染至AGS细胞株;空白对照组:PBS转染AGS细胞株;无意义序列组:将NRP-2的control-siRNA转染至胃癌AGS细胞株;用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)在mRNA水平检测三组NRP-2表达水平的差异性;MTT法检测三组细胞株的增殖情况;免疫细胞化学染色法检测三组细胞株中与增殖有关的Ki-67蛋白的表达;流式细胞仪检测三组细胞株的凋亡情况;Transwell小室实验检测三组细胞株的侵袭及迁徙情况,统计数据并分析其差异性。结果1荧光显微镜检测结果:脂质体Lip-2000介导的带有荧光的NRP-2-siRNA可成功转染至胃癌AGS细胞株中,且转染效率达80%以上;2 qPCR检测结果:转染组胃癌AGS细胞中NRP-2的mRNA相对表达量明显低于空白对照组及无意义序列组,差异有统计学意义(P<0.05);3 MTT法检测结果:转染组胃癌AGS细胞的增殖能力显著低于空白对照组及无意义序列组,差异具有统计学意义(P<0.05);4免疫细胞化学染色法结果:转染组胃癌AGS细胞株的ki-67蛋白相对表达量显著低于空白对照组及无意义序列组,差异具有统计学意义(P<0.05);5流式细胞仪检测结果:转染组停滞在Gl期的胃癌AGS细胞明显多于空白对照组及无意义序列组,差异具有统计学意义(P<0.05),表明转染组胃癌细胞生长周期出现抑制;6 Transwell小室迁徙实验结果:转染组的胃癌AGS细胞迁徙能力显著低于空白对照组及无意义序列组,且差异有统计学意义(P<0.05);7 Transwell小室侵袭实验结果:转染组的胃癌AGS细胞侵袭能力显著低于空白对照组及无意义序列组,并且其差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过脂质体Lip-2000将沉默NRP-2的siRNA转染至人胃癌AGS细胞中后,引起了一系列生物学行为的变化:其NRP-2的mRNA相对表达量明显降低、细胞增殖能力明显下降、ki-67蛋白相对表达量明显下降、细胞生长周期明显受到抑制、细胞的迁徙、侵袭能力显著下降。NRP-2有望成为胃癌治疗的新靶点。