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泻心汤始载于《金匮要略》,由大黄、黄连、黄芩组成。本研究通过对泻心汤抗菌效应和泻心汤中黄连生物碱尿排泄动力学规律的研究,为泻心汤的合理应用、配伍规律和组方优化的进一步研究提供依据。
本研究分为以下三部分:
一.泻心汤的抗菌作用研究
选用金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌及绿脓杆菌为受试菌,采用倍比稀释法,观察泻心汤的最低抑菌浓度。同时采用血清药理学方法,观察大鼠灌服泻心汤12 g/kg后15 min、4 h血清的抑菌效应。结果表明泻心汤在体外对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌的MIC分别为6.25、6.25和100 mg/ml,而大鼠给药后含药血清仅具有较弱的抑菌作用。提示泻心汤在体外具有一定抑菌效应,其体内抑菌作用较弱。
二.大鼠尿样中黄连生物碱类成分测定方法研究
建立了采用反相色谱-外光谱法同时测定大鼠尿样中黄连碱、巴马汀和小檗碱三种黄连生物碱的分析方法。尿样碱化后用乙醚液-液萃取。色谱柱为Agilient SB C18柱(5μm,250×4.6 m),柱温为30℃;流动相为A (水:甲酸:三乙胺100:2:0.1,v/v/v)-B(乙腈),采用梯度洗脱,流速为1.0mL·min<-1>;紫外检测波长为346nm。三种生物碱的检测范围均是1.6-160ng/mL,黄连碱、巴马汀和小檗碱的平均准确度分别为90.4-108.3%,99.2-110.1%和93.7-107.8%,批内、批间变异分别小于10.1%和11.1%。本法灵敏度较高,准确可靠,重现性好,结果稳定,适合用于大鼠灌胃泻心汤和不同配伍后黄连碱、巴马汀和小檗碱的尿排泄药代动力学研究。
三.大鼠体内泻心汤中黄连生物碱尿排泄动力学研究
采用HPLC法研究大鼠灌服泻心汤后三种黄连生物碱的尿药排泄过程,SD大鼠灌服泻心汤12g生药/kg后,小檗碱的t<,1/2>为14.6±8.2 h,K<,e>为0.066±0.047h<-1>,尿药排泄总量为467.1±203.0 ng,占给药量0.022±0.008‰,;黄连碱的t<,1/2>为12.4±7.4h,K<,e>为0.075±0.042 h<-1>,尿药排泄总量为120.2±27.2 ng,占给药量0.035±0.009‰;巴马汀的t<,1/2>为10.6±4.5 h,K<,e>为0.079±0.040 h<-1>,尿药排泄总量为203.4±30.3 ng,占给药量0.036±0.006‰,结果表明小檗碱为三种生物碱中经尿排泄的主要成分,三种生物碱具有相似的排泄规律。研究大鼠灌服泻心汤及不同配伍后三种生物碱尿排泄动力学特点。20只大鼠随机分成4组,分别灌服黄连、大黄黄连、黄芩黄连和泻心汤提取物,与不同时间采集样品。尿样处理后采用HPLC法测定生物碱浓度,并折合成排泄量。用尿排泄量——时间数据拟合药动学参数。与黄连组比较,泻心汤组、大黄黄连组、黄芩黄连组中黄连碱、巴马汀和小檗碱三种成分的t1/2和Ke差异无显著意义;与黄连组比较,泻心汤组、大黄黄连组、黄芩黄连组中黄连碱尿累积排泄量占给药量的比率均有减少趋势,其中泻心汤组差异具有统计学意义(P<0.05),提示配伍能减少黄连碱尿排泄。