第一部分 c-Jun氨基末端激酶通路在大鼠缺血再灌注脑损伤中作用的研究　　 目的：　　 观察磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)在大鼠缺血再灌注损伤脑组织中的变化规律，探讨其抑制剂SP600125对大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用。　　 方法：　　 1.采用改良Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。实验动物随机分为对照组、缺血再灌注(IR)组、缺血再灌注+二甲亚砜(IR+DMSO)组、缺血再灌注+DMSO+SP600125干预(IR+SP)组。IR+DMSO组及IR+SP组随机分为缺血2 h再灌注6、12、24、72 h组。　　 2.采用TTC染色观察脑梗死体积，HE染色观察缺血坏死神经元改变。　　 3.采用免疫组化和蛋白免疫印迹法(western blot)检测各组活化的c-Jun氨基末端激酶p-JNK，观察p-JNK在缺血再灌注脑组织不同时程的变化规律。　　 4.观察p-JNK抑制剂SP600125对p-JNK表达的影响。　　 结果：　　 1.线栓法制备缺血再灌注模型成功率为75.6％；TTC染色可见大脑中动脉供血区梗死灶；HE染色可见梗死区神经元缺血坏死改变。　　 2.p-JNK免疫组化研究显示：对照组大鼠神经元、神经胶质细胞棕褐色染色阴性。IR+DMSO组再灌注6h神经元、神经胶质细胞胞核呈棕褐色染色；再灌注12h，胞核浓染，阳性细胞数增多：再灌注24h阳性细胞数减少；至72h阳性表达仍持续较高水平。SP600125干预组大鼠神经元、神经胶质细胞核为浅或中等程度棕黄色颗粒沉积，阳性细胞数较IR+DMSO组减少(P<0.05)。　　 3.Western blot研究发现，再灌注6h脑组织p-JNK表达升高，在12 h达高峰，24h表达略下降，72 h仍有较高表达。SP600125干预组较IR组及IR+DMSO组大鼠脑组织p-JNK表达显著降低(P<0.01)，高峰不明显(P>0.05)。　　 结论　　 1.线栓法致大鼠脑组织缺血再灌注损伤后神经元、神经胶质细胞表现为坏死样形态改变。　　 2.p-JNK的活性在脑损伤时表现出时间依赖性增高，该变化可被SP600125抑制。　　 3.SP600125可减轻缺血再灌注造成的神经元损伤。　　 第二部分内质网通路在大鼠缺血再灌注脑损伤中的作用及p-JNK抑制剂的影响　　 目的：　　 观察内质网通路中的凋亡相关蛋白GADD153、caspase-12在大鼠缺血再灌注脑损伤不同时程的变化规律，并探讨p-JNK抑制剂SP600125对二者表达的影响。　　 方法：　　 1.建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，实验动物随机分为对照组、缺血再灌注(IR)组、缺血再灌注十二甲亚砜(IR+DMSO)组、缺血再灌注+DMSO+SP600125干预(IR+SP)组。IR+DMSO组及IR+SP组随机分为缺血2 h再灌注6、12、24、72 h组。　　 2.采用免疫组化、Western blot及免疫荧光双标法检测缺血再灌注不同时间点GADD153、caspase-12的变化。　　 结果：　　 1.免疫组化和免疫荧光双标检测显示脑缺血再灌注后皮层和纹状体区GADD153表达均增高，神经元及神经胶质细胞胞核、胞浆呈棕褐色染色，阳性细胞主要位于纹状体区，皮层表达较少，P<0.05；Western blot结果显示再灌注6hGADD153表达增加，持续至72h仍明显增高，P<0.05。　　 2.应用SP600125干预后，与DMSO组比较，再灌注6、12h GADD153的表达变化不明显(P>0.05)，24、72h GADD153的表达明显下降(P<0.05)。　　 3.免疫组化和免疫荧光双标检测显示脑缺血再灌注后皮层和纹状体区caspase-12表达均增高，神经元及神经胶质细胞胞浆呈棕褐色染色，而纹状体caspase-12表达明显高于皮层(P<0.05)；Western blot结果显示再灌注6hcaspase-12表达增加，逐渐增高，至24达高峰(P<0.01)，72h仍维持在较高水平。　　 4.应用SP600125干预后，caspase-12在缺血再灌注脑组织的表达明显低于无SP600125干预组(P<0.05)，高峰期不明显(P>0.05)。　　 5.DMSO组免疫荧光双标染色显示，再灌注6h可见GADD153、caspase-12单标及双标阳性细胞，主要位于纹状体区；12～24h二者单标及双标阳性细胞数均明显增多(P<0.05)，主要位于纹状体区，皮层区也可见少量表达；至72h，GADD153单标阳性细胞数减少，caspase-12单标阳性细胞数仍较多，双标阳性细胞数减少(P<0.05)。　　 6.与DMSO组比较，SP组GADD153单标阳性细胞数略有减少，caspase-12单标阳性细胞数及双标阳性细胞数明显减少(P<0.05)。　　 结论：　　 1.GADD153和caspase-12在缺血再灌注脑组织中的表达增加，内质网应激参与了缺血再灌注脑损伤的病理过程。　　 2.缺血再灌注脑损伤时，c-Jun氨基末端激酶通路可能通过激活caspase-12途径参与了内质网应激反应过程。