研究目的1．了解胃泌素释放肽（gastrin-releasing peptide GRP）在小细胞肺癌细胞株及组织中的表达率及表达位置。2．研究抗胃泌素释放肽前体(pro-gastrin-releasing peptide_31-98ProGRP_31-98)单克隆抗体E-B₅的¹³¹I标记方法、¹³¹I-E-B₅的稳定性及标记后抗体免疫活性。3．研究¹³¹I-E-B₅在正常昆明小鼠及小细胞肺癌荷瘤裸鼠体内的分布情况，探讨¹³¹I-E-B₅的体内药代动力学过程。4．研究¹³¹I-E-B₅对不同类型肿瘤的显像效果及最佳显像时间。5．探讨¹³¹I-E-B₅放射免疫治疗小细胞肺癌的可行性及其疗效。研究方法1．采用流式细胞仪检测小细胞肺癌NCI-H446细胞株及肺腺癌A549胞株中GRP表达情况，通过免疫组化法检测人小细胞肺癌组织中GRP的表达情况。2．E-B₅的¹³¹I标记采用氯胺-T法，通过纸层析法检测标记率、放化纯，将¹³¹I-E-B₅置于37℃水浴箱及与正常人血清混合后在不同时间点测定放化纯以了解其稳定性，利用细胞结合分析法测定¹³¹I-E-B₅的免疫活性。3．自昆明小鼠尾静脉注射¹³¹I-E-B₅后不同时间点断颈动脉处死小鼠，同时取血液及各主要脏器组织，计算各时间点的％ID／g及药物动力学参数。建立人小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型，自荷瘤裸鼠尾静脉注射¹³¹I-E-B₅后不同时间点处死裸鼠并取各主要脏器组织，计算各时间点的％ID／g和T／NT值。4．分别对荷小细胞肺癌、肺腺癌和大肠癌裸鼠模型进行¹³¹I-E-B₅显像，观察移植瘤的显影情况并计算瘤体与对侧相同部位的T／B比值。5．治疗实验采用瘤内注射方式，根据治疗剂量的不同，将小细胞肺癌荷瘤裸鼠随机分为未处理组、¹³¹I-E-B₅治疗组和Na¹³¹I对照组，动态观察裸鼠及移植瘤生长情况，测量不同时间瘤体的大小，计算抑制率并绘制肿瘤生长曲线。研究结果1．GRP在NCI-H446和A549细胞株中的表达率分别为89％、12％；免疫组化检测见人小细胞肺癌组织切片中有明显的E-B₂阳性细胞分布，并显示棕黄色颗粒在肿瘤细胞的细胞浆内。2．¹³¹I-E-B₅标记率为90．8％，放化纯为99．28％，放射性比活度为2．69MBq／μg；在37℃水浴箱放置6h后¹³¹I-E-B₅放化纯高达90％，24h后仍大于70％；和正常人血清充分混合24小时后¹³¹I-E-B₅放化纯达68．1％。；¹³¹I-E-B₅对NCI-H446和A549细胞株的免疫结合率分别为71．6％、33．2％。3．¹³¹I-E-B₅在正常昆明小鼠的体内过程符合一级血药动力学二室模型，主要通过肝脏、肾脏代谢，血液清除速度较快。注射后48h移植瘤体的％ID／g显著高于其它脏器及组织，72h时达到最高值，T／NT比值随时间延长而逐渐升高。4．注射后24h小细胞肺癌荷瘤裸鼠移植瘤部位明显聚集¹³¹I-E-B₅，随时间延长移植瘤部位放射性浓聚程度逐渐增强，72h和96h时最为清晰。肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤部位未见明显¹³¹I-E-B₅聚集。大肠癌荷瘤裸鼠显像结果和小细胞肺癌荷瘤裸鼠显像结果类似，但肉眼观察移植瘤部位浓聚¹³¹I-E-B₅程度低于小细胞肺癌荷瘤裸鼠。小细胞肺癌各时相点的T／B值均明显高于大肠癌，两者均明显高于肺腺癌裸鼠模型，而肺腺癌裸鼠模型的T／B比值没有明显的变化。5．¹³¹I-E-B₅治疗组的肿瘤抑制率明显大于Na¹³¹I组。¹³¹I-E-B₅治疗2周后移植瘤开始明显缩小，瘤体表面出现明显的点状破溃、坏死并逐渐扩大，4周后100μCi和200μCi剂量组仍可见杯状的溃疡灶，而400μCi和600μCi剂量组的肿瘤几乎全部消失。¹³¹I对照组移植瘤生长缓慢，但瘤体在观察期内无明显的缩小，仅在400μCi和600μCi剂量组的肿瘤表面出现点状的破溃坏死。结论1．¹³¹I-E-B₅标记率及放化纯高，在体内、体外有很好的稳定性，¹³¹I标记后的E-B₅仍然保持着较好的免疫活性。2．¹³¹I-E-B₅能选择性浓聚在GRP表达阳性的肿瘤部位，对小细胞肺癌有较好的靶向作用，肿瘤局部注射后可以抑制小细胞肺癌移植瘤的生长并破坏肿瘤组织。3．¹³¹I-E-B₅有望成为一种较为理想的小细胞肺癌放射免疫显像及治疗药物，具有潜在的较为广阔的临床应用前景，值得进一步开展深入的研究。