荞麦酚类化合物抗氧化和抗增殖活性研究

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本文主要研究了苦荞(Fagopyrum tartaricum L. Gaerth)与甜荞(Fagopyrum esculentum Moench)中酚类化合物的含量及其抗氧化活性,并深入研究了两种苦荞麸皮酚类化合物的主要成分组成、细胞抗氧化及抗肿瘤细胞增殖的活性。(一)以十种荞麦(三种甜荞、七种苦荞)为实验材料,研究了其籽粒外壳、麸皮及内粉中游离态和结合态酚类化合物的含量。并通过DPPH·自由基清除能力以及总还原力(铁氰化钾还原法)实验,评价了荞麦酚类提取物的化学抗氧化性。结果表明:游离态是荞麦壳、麸皮及粉中酚类化合物的主要存在形式(10种荞麦壳、麸皮和粉的游离酚含量分别占其各自总酚含量的79.70%、92.89%和94.07%);苦荞酚类化合物的含量及抗氧化活性普遍高于甜荞的,且苦荞麸皮总酚含量最高(平均总酚含量为24.87mg GAE/g dwb);甜荞壳和苦荞麸皮中的酚类化合物表现出较强的还原力和清除DPPH·自由基能力;相对于荞麦壳和粉而言,苦荞麸皮在酚类化合物的含量及抗氧化能力方面更占优势。(二)采用RP-HPLC-DAD/ESI-TOF-MS法对重庆酉阳和四川西昌的两种苦荞麸皮中主要的酚类化合物进行定性分析。研究发现:重庆酉阳和四川西昌苦荞麸皮中酚类化合物的组成基本相同,均含有儿茶素类、(-)-表儿茶素-3-3”-氧-甲基没食子酸酯、原儿茶酸、儿茶素糖苷衍生物、牡荆素、绿原酸、二咖啡酰奎尼酸衍生物、3-氧-甲基没食子酸、杨梅素、芦丁、咖啡酸己糖、异槲皮苷和槲皮素共十三种酚类化合物,由此发现黄酮类是苦荞麸皮主要的酚类化合物。(三)检测了重庆酉阳和四川西昌两种苦荞麸皮酚类提取物的化学抗氧化能力(Oxygen radical absorbance capacity, ORAC)和细胞抗氧化能力(Cellular antioxidant activity, CAA)。结果表明:两种苦荞麸皮游离态和结合态酚类提取物均表现出一定的化学抗氧化能力,并且四川西昌苦荞麸皮酚类提取物的总ORAC值(106.8±0.2μmol TE/g DW)明显高于重庆酉阳苦荞麸皮的(75.3±5.8μmol TE/gDW)(p<0.05)。在细胞抗氧化实验中,重庆酉阳和四川西昌两种苦荞麸皮游离酚提取物均表现出一定的细胞抗氧化能力,其相应的CAA值分别为34.5±1.8μmol of QE/100g和46.4±5.8μmol of QE/100g (PBS清洗);39.8±2.4μmol of QE/100g和53.8±2.5μmol of QE/100g (不经PBS清洗),而结合酚提取物则不具备细胞抗氧化活性。相关性分析结果发现,酚类化合物的含量与其抗氧化能力之间存在显著正相关性。(四)考察了重庆酉阳和四川西昌两种苦荞麸皮酚类提取物抑制人肝癌细胞(HepG2)和人结肠癌细胞(Caco-2)增殖的能力。在HepG2抗增殖实验中,重庆酉阳和四川西昌两种苦荞麸皮游离酚提取物的ECso值分别为16.2±0.2mg-mL-1和17.4土0.2mg-mL-1;在Caco-2抗增殖实验中,重庆酉阳和四川西昌两种苦荞麸皮游离酚提取物的EC50值分别为22.3±0.4mg·mL-1和14.5±0.2mg·mL-1。也即,在不产生细胞毒性的浓度范围内,两种苦荞麸皮游离酚提取物能显著抑制HepG2和Caco-2细胞的增殖,并呈现一定的剂量—效应关系。相反的,两种苦荞麸皮结合酚提取物,对HepG2细胞不具有抗增殖作用,对Caco-2细胞表现出弱抗增殖作用。
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