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艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiency virus,HIV）感染引起的疾病，是危害人类健康最严重的病毒性疾病之一。爱滋病被发现迄今31年时间里，尽管人们还没有研制出有效的疫苗来防治此病，但是已经发现了几种具有广谱中和性的单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb），B12、VRC01、2G12、2F5、4E10等。其中，B12和VRC01分别能够抑制大约40%和90%的全球流行的艾滋病毒毒株，具有广谱、强效的中和HIV的活性。单独或联合使用这些单克隆抗体，能有效地阻断病毒的感染。因此本研究运用基因从头合成和重叠PCR的方法获得HIV-1中和性抗体B12和VRC01的全基因序列，并在杆状病毒表达系统中进行表达。本研究根据GenBank已公布的VRC01抗体可变区的氨基酸序列，结合本实验室保存的B12抗体基因序列设计引物，合成、克隆了B12和VRC01抗体轻链和重链全长基因B12L、B12H、VRC01L和VRC01H，大小分别为710bp、1452bp、709bp和1434bp，所克隆基因根据昆虫细胞密码子偏爱性均进行了优化。然后运用双酶切连接的方法成功地构建了四个重组质粒B12L-pTriEx1.1、B12H-pTriEx1.1、VRC01L-pTriEx1.1和VRC01H-pTriEx1.1，并分别与Bacmid DNA共转染sf9昆虫细胞，获得了携带抗体基因的重组病毒。Western blot结果显示重链基因和轻链基因在昆虫细胞中都正确表达，分子质量分别为约55kDa和约25kDa。用抗体轻链重组病毒和重链重组病毒（rAC-B12L/rAC-B12H和rAC-VRC01L/rAC-VRC01H，“/”表示共同感染）混合感染Sf9昆虫细胞，非还原性Western blot结果显示表达的蛋白分子量约为160kDa，表明用两种重组病毒共感染后所表达的抗体重链、轻链可通过分子间二硫键结合，组装成与天然抗体类似结构的VRC01和B12全抗体。将重组抗体用DTT还原后，Western blot结果显示，在55kDa和约25kDa处出现了两条特异性条带，说明DTT打开了重链和轻链之间的二硫键，进一步验证了以上推测的正确性。ELISA结果显示，重组抗体B12和VRC01均具有结合病毒抗原gp120的活性。本研究在体外合成了编码B12和VRC01全抗体的基因，用杆状病毒／昆虫细胞表达系统高效表达了这两个抗体，并对其特异性和抗原结合活性进行了鉴定，建立起了在昆虫细胞内表达单克隆抗体的平台体系，并为这两个抗体在HIV诊断和HIV治疗性疫苗的设计方面奠定了基础。