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目的：
1．对氯化镉(CdCl<,2>)恶性转化人支气管上皮细胞(16HBE)中翻译启动因子的表达量变化进行筛选，以期为职业接触镉等重金属人群的暴露/反应生物标志物的寻找提供初步依据。
2．对经氯化镉和硫化镍(NiS)恶性转化的16HBE细胞中上调翻译启动因子eIF3 p36cDNA进行克隆与序列分析，以进一步探讨镉、镍重金属的分子致癌机制。
方法：
1．将前期实验中冻存的16HBE细胞及经CdCl<,2>恶性转化16HBE裸鼠成瘤细胞进行复苏，经含有10％小牛血清的MEM培养基培养后，按TRIZOL 试剂盒说明书对这些细胞进行总RNA的提取，在核酸定量仪下测定其浓度和纯度，并经2％琼脂糖凝胶电泳后，于紫外分析仪下检测总RNA的完整性。
2．从Genebank中调出23个翻译启动因子片段的基因序列，用Primer express 2.0设计上下游引物，采用逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，以β-Actin作为内参对照，半定量检测各翻译启动因子片段的mRNA表达水平；接下来采用SYBR Green I荧光定量PCR(FQ-PCR)方法，进一步准确地测定对照细胞及成瘤细胞中各翻译启动因子片段的mRNA的表达差异。
3．用有限稀释法分别建立16HBE对照细胞及经镉，镍恶性转化16HBE成瘤细胞的单细胞克隆株(每组10株)，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得目的基因翻译起始因子eIF3 p36的eDNA，将三组细胞目的基因产物连接到T载体中，转化、扩增重组质粒。提取大肠杆菌中的重组质粒进行DNA测序，将三组DNA测序所得到的基因序列进行对比分析。
结果：
1．细胞总RNA的完整性及纯度分析。从实验组和对照组细胞中分别提取总RNA，并在核酸蛋白定量仪上进行检测，其oD260/OD280值均在1.9-2.0之间，表明总RNA较纯；琼脂糖凝胶电泳结果显示28S及18s条带清晰，且28S条带亮度是18S的两倍，表明总RNA完整无降解，可用于后续实验检测。
2．各翻译启动因子mRNA表达情况。两步法RT-PCR扩增待检细胞总RNA，获得各翻译因子cDNA目的片段。经琼脂糖凝胶电泳鉴定RT-PCR产物，并用凝胶成像系统扫描各翻译因子和β-Actin电泳条带，结果初步显示与非转化16HBE对照细胞相比，CdCl<,2>恶性转化16HBE裸鼠成瘤细胞中人翻译起始因子eIF 2a、eIF 2Cl、eIF 4E mRNA的表达量有不同程度增高；而翻译起始因子eIF 2 B、eIF 4E BP mRNA的表达量则明显降低。通过SYBR Greerl荧光定量PCR进一步检测确定，非转化对照细胞与成瘤细胞间上述5个翻译启动因子mRNA的表达量存在明显差异，其中eIF 4E、eIF 2β差异尤为显著。
3．三组细胞中翻译起始因子eIF3 p36亚基的克隆及序列分析。正常16HBE对照细胞组10株细胞翻译起始因子的基因序列与Genbank数据库进行同源性比较，相似性比值均为100％，证实所克隆序列确为人翻译起始因子eIF3 p36亚基的cDNA，且未发现基因突变位点。同样，应用多序列比较软件对所有镉、镍恶性转化16HBE成瘤细胞株进行序列对比分析亦未发现差异，无基因突变现象。
结论：
1．氯化镉转化16HBE成瘤细胞中，存在着明显的翻译启动因子eIF 2a、eIF 2Cl、eIF 4E mRNA表达升高，eIF 2β、eIF 4EBP mRNA表达降低的现象，表明镉的致癌作用可能涉及多种翻译因子的异常表达。
2．首次发现镉恶性转化16HBE细胞中，eIF 2β和eIF4E的表达量与对照细胞相差100倍以上，提示其可作为人群镉暴露/反应生物标志物进行研究。
3．镉、镍恶性转化16HBE细胞过程中，上调翻译启动因子eIF3 p36亚基序列可能不是镉、镍重金属攻击的靶序列，提示在镉、镍致癌中可能涉及到表遗传机制。