三聚氰胺及其类似物对dsDNA及EcoRⅠ等核酸酶的影响

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三聚氰胺(MEL)、三聚氰酸(CYA)都是高产量、多用途的化工品。但是,自MEL被非法加入婴儿奶粉和许多乳制品、农副产品中的滥用事件之后,引起全球对三聚氰胺在食品中和自然界中的持续关注。MEL等三嗪类物质能通过多种途径进入自然环境。其中,包括作为化肥生产的原料,伴随化肥的使用进入土壤和水域环境;另外,MEL等作为动物饲料添加剂和农药、消毒剂等的代谢产物进入食物链;还包括从工业产品中迁移等渠道。面对MEL等三嗪类污染物在环境中长期低剂量的存在的现实,大多数研究关注MEL的急性毒性、亚急性毒性,对于分子水平作用机制的研究相对较少。因此从分子水平研究它们对生物大分子结构、功能和参与的生命活动的影响是很有必要的。核酸是承载生命体遗传信息的一类生物大分子,对生命活动有着重要作用。本研究选择dsDNA与核酸酶之间的反应,旨在理解MEL等对核酸类生物大分子活性的影响。MEL能够改变DNA热差光谱间接反映了碱基堆积受到MEL的扰动且CYA与MEL一定程度上能够干扰互补双链的配对。CYA和MEL能够增加dsDNA的热稳定性使解链温度上升,与DNA存在弱的相互作用,且不改变环状DNA的超螺旋状态。CYA、MEL及其类似物(2,4-二氨基-6-甲基-1,3,5-三嗪和2,4,6-三氨基嘧啶)主要结合在DNA双螺旋上的小沟区域。与几种小分子之间结构上的相似性相关,它们都能够作用于核酸和蛋白质。BAL-31酶与dsDNA反应时MEL和CYA都能促进反应的进行。BAL-31的荧光能够被CYA猝灭,酪氨酸和色氨酸特征的同步荧光峰在CYA的影响下发生蓝移,说明二者之间存在相互作用。MEL和CYA在DNA与EcoR Ⅰ,Nde Ⅰ和Pst Ⅰ三种酶的反应中均有非单调性的促进。在与EcoR Ⅰ模拟对接结果中,MEL以及结构类似物包括CYA都结合在相同位置且与EcoRⅠ的活性位点接近所以四种小分子都可能对活性位点处的构象产生干扰。圆二色谱结果显示MEL等小分子与BSA相互作用导致肽链二级结构趋向于展开。同步荧光实验发现四种小分子都能改变EcoR Ⅰ上色氨酸残基微环境,2,4,6-三氨基嘧啶对EcoR Ⅰ和BSA具有更强的作用效果,它与两种蛋白的相互作用力的类型是疏水作用力。
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