慢传输性便秘是功能性便秘的一种,其特点是可以延长粪便在结肠中的传输时间并且在进食后使结肠推进的速率减缓。目前采用的治疗方法,大多应用各种泻药和胃肠动力药,但是长期使用这些药物会导致患者对药物产生依赖,进而造成了顽固性便秘,甚至是肠梗阻。本实验通过比较裙带菜多糖(WP)及其低聚糖(WO)对洛哌丁胺诱发的便秘的治疗作用,确定裙带菜多糖及其低聚糖对便秘的缓解作用,探索干预机制,为临床治疗便秘提供补充医学疗法。目的:检测裙带菜多糖(WP,简称多糖)及其寡糖(WO,简称寡糖)对洛哌丁胺引起小鼠便秘的缓解作用;通过PCR-DGGE、16SrRNA基因测序等实验方法分析肠道菌群结构,阐明多糖及寡糖通过恢复肠道菌群平衡改善便秘的机制。方法:1.将所有小鼠随机分为四组(无处理组(No),洛哌丁胺(Lop)组,洛哌丁胺+多糖(Lop+WP)组,洛哌丁胺+寡糖(Lop+WO)组),每组5只。给予所有小鼠9.6 mg/kg浓度的洛哌丁胺每日两次连续灌胃14天,之后分别给予洛哌丁胺+多糖(Lop+WP)组,洛哌丁胺+寡糖(Lop+WO)组多糖和寡糖。2.通过PCR-DGGE技术获得菌群指纹图谱,采用Quantity one分析软件来构建进化树,用以分析菌群指纹图谱的相似性及其多样性,并选取差异条带进行切胶测序,以确定差异条带所代表的细菌种属;检测洛哌丁胺诱导的便秘小鼠对粪便含水量,排便频率,胃肠道转运(GI)时间和食物摄入量的影响,通过对远端结肠中结肠氯(cl~-)含量和血管活性肠肽受体1(VIPR1),粘蛋白-2(Muc2)的表达来检测多糖和寡糖对肠道屏障的修复效果。在此基础上,通过16SrRNA高通量基因测序对各组PCR-DGGE结果进行最终确认。结果:1、裙带菜多糖可以明显改善由洛哌丁胺引起的便秘并且增加菌群多样性,但寡糖的效果不如多糖,即对便秘和菌群均有所改善,但无显著性差异。多糖能够显著增强肠道运动功能,缓解便秘引起的肠道炎症。2、WP和WO均可以增加粪便含水量、排便频率,并且可以缩短胃肠转运时间(WP效果显著,但WO虽有效果但效果不明显),食物摄入量方面,经过WP和WO治疗后对于食物的摄入量也有所增加。3、WP可显著增加结肠中Muc2表达,下调VIPR1的表达。WO的作用与WP相似,但不显著。4、在WP和WO处理后,16SrRNA测序分析微生物群落结构和基因组分布显示肠道微生态丰富度发生变化进而推断WO和WP可以改善便秘。结论:裙带菜多糖及其寡糖可以改善洛哌丁胺引起的小鼠便秘,提示裙带菜多糖及其低聚糖对便秘具有一定的治疗作用。裙带菜多糖及其寡糖能够纠正便秘引起的肠道菌群的失衡,以及修复肠道屏障的损伤。该实验结果为临床通过食物补充疗法治疗便秘提供了依据。