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目的:研究HDAC6与HP在胃黏膜癌变过程中的表达以及相互作用,探讨HDAC6表达与临床病理因素的关系,预测胃癌患者的预后。探讨HP感染对HDAC家族其他成员的影响。 方法:本实验收集了从2011-2016年就诊于包头市中心医院的364例胃镜活检标本,其中正常胃黏膜组织(Normal)21例,浅表性胃炎(CSG)40例,萎缩性胃炎(CAG)106例,肠上皮化生(IM)94例,不典型增生(DYS)64例,胃癌(GC)患者39例,采用免疫组织化学方法检测各组HP与HDAC6的表达情况;另外收集我院胃癌手术患者以及组织芯片80例,收集患者年龄、性别、分化程度、分期等临床病理因素,探讨HDAC6在胃黏膜病变不同时期分布特点以及与预后相关性。利用组织、细胞系qRT-PCR验证免疫组织化学结果;5对新鲜配对胃癌组织拟Western blotting检测HDAC6蛋白表达。拟用qRT-PCR检测胃癌细胞系BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、N87和胃正常黏膜细胞系GES1中HDAC6以及HDAC家族代表成员(HDAC1、HDAC4、SIRT1)表达;用Western blotting进一步验证各成员的表达水平;用HP活菌-SS1感染GES1永生化细胞系,探讨HP对HDAC6表达水平影响。构建HP感染昆明鼠模型,测定HP感染率,用qRT-PCR和Western blotting测定HDAC家族各成员表达水平以及HP感染对其表达的影响。 结果:(1)免疫组化显示HDAC6在正常组织、浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃癌组中表达率依次为:85.7%、62.5%、18.9%、26.6%、31.2%、30.8%;在正常组织以及浅表性胃炎中为高表达,在癌前病变以及胃癌中低表达,差异有统计学意义(P<0.01); HDAC6表达与HP感染呈负相关,同时发现HDAC6在正常胃黏膜向胃癌恶性转化阶段,细胞浆定位有减少趋势,分别是88.9%,72.0%,20.0%,16.0%,25.0%,41.7%。(2)HDAC6表达与年龄、性别、分化程度、分期无关。多因素回归分析显示HDAC6为胃癌的独立预后因素(P=0.039)。(3)qRT-PCR结果显示:HDAC6在正常胃组织中高表达,胃癌组织中表达下调;Western blotting验证了这一结果,在GES1细胞系中高表达,在BGC823、SGC7901、AGS、N87等胃癌细胞系表达有不同程度降低。HDAC1在BGC823、SGC7901、AGS中高表达,在N87、GES1中低表达。HDAC4在SGC7901中相对高表达;SIRT1在BGC823中相对高表达。(4)HP菌株与GES1共培养0h、6h、12h、24h、48h后,HDAC6表达依次降低。HP菌株与GES1共培养24h,分别加入0ul、100ul、500ul、1000ul的HP活菌,HDAC6表达依次降低。(5)昆明鼠模型中,感染组的HP感染率明显高于肉汤组,qRT-PCR结果显示HDAC6表达率明显低于肉汤组,差异有统计学意义(P=0.005)。HDAC1、HDAC4感染组与肉汤组差异有统计学意义。SIRT1组差异无统计学意义。Western结果显示HDAC6、SIRT1感染组较肉汤组表达下调,HDAC1、HDAC4则相反,感染组与肉汤组相比高表达。 结论:(1)从qRT-PCR以及Western、免疫组化结果可以看出,HP可以介导HDAC6表达。(2)HDAC6表达与胃癌预后相关。(3)HP可以促进HDAC1、HDAC4的表达。(4)HDAC6的胞核胞浆定位在胃黏膜癌变过程中存在生物学差异。