中国西南地区淫羊藿属植物遗传与进化研究

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本研究从分类学、细胞学、同工酶、杂交和药用成分分析等方面对收集到的淫羊藿属56个收集系共18个种进行该属系统学研究。具体结果如下:数量分类显示,该属所有被研究的种类在系统树上能够容易的分开。对于Diphyllon组下分类,Brachycerae系的划分可以被数量分类结果很好的支持。在该属的分类研究过程中,发现了一个新种,命名为印江淫羊藿,并已经发表在国际刊物《Novon)》。该属18个种的核形态学分析结果显示,除了新种印江淫羊藿是24条染色体外,其余17种都是12条染色体。四倍体物种首次在淫羊藿属被发现。被研究的所有物种有一个相似的核型,除了黔岭淫羊藿与箭叶淫羊藿第六对染色体是亚端着丝粒染色体,其余都只有中间和亚中间两种染色体。次缢痕在所有的研究种类中普遍存在,位于第1或第2对染色体端臂远着丝粒端。所有被研究种类的核型相似系数是相对原始的,1A,2A或者3A。运用荧光原位杂交技术首次对该属45Sand 5S rDNA进行了物理定位。该属45S and 5S rDNA基因位点的分布有以下几个特征:(1)除了水城淫羊藿之外,所有研究的种类第1与第2对染色体均分布一对45S rDNA基因位点。绝大多数位点信号很清晰,分布在染色体短臂的远着丝粒区。(2) Diphyllon组的所有种类第4对染色体长臂的近着丝粒区分布1对5S rDNA基因位点。而Epimedium组的两个种E. alpinum和E. pubigerum第4、5对染色体长臂的近着丝粒区分别分布2对5SrDNA基因位点。(3)Diphyllon组下,除了水城淫羊藿的所有小花种类均有3对45SrDNA基因位点,明显多于该组下的大花种类。该组下除了宝兴淫羊藿的大花种类45S rDNA基因位点均只有2对。(4)基于45S and 5S rDNA基因位点的分布模式及染色体其他形态特征,该属被研究的14个种类的6对同源染色体可以清楚的被区分。该属植物的总黄酮及淫羊藿苷含量分析结果显示粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿、箭叶淫羊藿3个种类的自然居群总黄酮及淫羊藿苷含量达到了《中国药典》(2005)规定的标准:总黄酮含量大于5%,淫羊藿苷含量大于0.5%。但是粗毛淫羊藿人工种植的居群药用成分含量却未能达到该标准。不同种类、居群总黄酮、淫羊藿苷含量之间具有明显的差异;而6月与10月收割的样品,总黄酮与淫羊藿苷含量之间没有显著的差异。该属6种同工酶(酯酶、葡糖苷酶、磷酸葡萄糖变位酶、过氧化物酶、5-磷酸葡萄糖异构酶与超氧化物岐化酶)11个基因位点变异研究显示平均每个位点等位基因数(Ap)变异很小,从2.09到2.73。多态位点的百分数(P)较高(72.73%~100%)。所研究的36个居群的平均预期杂合度(He)波动范围为0.229至0.479。居群内遗传分化系数(HT)为0.5981,而居群间遗传分化系数(HS)仅有0.3534。聚类分析结果显示经典分类的物种可以明显的聚成一类,支持所研究的这些种之间确实是独立的,具有明显的界限。杂交试验设计了四种方式:自交、居群内杂交、种内居群间杂交和种间杂交。对9个居群的自交授粉显示该属植物具有高度自交不亲和性(结实率大多数为0,至多只有6.76%)。而种间杂交授粉显示了高度可杂交性(结实率为15.38%至92.44%),而且F1种子代具有高度的萌发率(大于20%)。三个种间杂交组合的F1植株被栽培至成熟植株。这些F1成熟植株的形态、体细胞的核形态学和花粉母细胞的减数分裂分析显示这些F1植株是高度可育的(花粉粒活性大于76.10%),不同种类同源染色体之间结构差异很小,并且大多数和他们亲本一样在花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ形成6个二价体。同时,少数情况下异常染色体行为也会发生,例如染色体桥、染色体数不等价分离、染色体延迟、微核等情况。
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