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目的:体内研究使用致癌剂诱导的2型糖尿病小鼠胃癌模型,探讨六味地黄丸对2型糖尿病相关性胃癌的发生率及病变胃黏膜增殖的影响,对胰岛素/胰岛素样生长因子1(IGF-1)信号通路的作用,对血清及组织促炎因子IL-6、TNF-α表达的影响,对血清脂肪因子脂联素、瘦素的作用。体外研究检测六味地黄丸对胃癌细胞MKN45增殖、细胞周期、凋亡的影响,验证六味地黄丸抗癌作用是否与IGF-1/IGF-1R信号通路有关,为六味地黄丸应用于2型糖尿病相关性胃癌的预防提供实验依据。方法:体内实验分为4组,非糖尿病组(db/m小鼠)、糖尿病对照组(db/db小鼠)、二甲双胍阳性对照组(db/db小鼠)、六味地黄丸组(db/db小鼠)。所有组均使用致癌剂N-甲基-N亚硝基脲(MNU)20周诱导胃癌发生。六味地黄丸组及二甲双胍组分别用药10周,糖尿病及非糖尿病对照组使用生理盐水10周。每周称量体重及饮食量,第1、20、30周时检测小鼠空腹血糖,胃组织病理切片染色检测胃癌及癌前病变,免疫组化检测病变胃黏膜增殖标志物Ki67表达,Elisa法检测血清胰岛素、IGF-1、IL-6、TNF-α、脂联素、瘦素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),蛋白免疫印迹法检测IGF-1R、AKT以及它们的磷酸化蛋白表达,实时定量荧光PCR检测胃组织IGF-1、IGF-1受体(IGF-1R)、IGF-2、IGF-2受体(IGF-2R)、胰岛素受体、IL-6、TNF-αmRNA的表达。体外实验用六味地黄丸水提液作用于胃癌细胞MKN45,CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白印迹法检测磷酸化IGF-1R、AKT、ERK1/2、JNK、P38、PARP蛋白的表达。IGF-1干预胃癌细胞后加入六味地黄丸水提液,重复上述实验过程及方法,检测六味地黄丸能否拮抗IGF-1的促增殖、抗凋亡作用及对IGF-1激活的IGF-1R信号通路的的影响。结果:体内实验结果显示,2型糖尿病小鼠胃异型增生较非糖尿病小鼠明显增加。与糖尿病对照组比较,阳性对照组二甲双胍及实验组六味地黄丸明显降低2型糖尿病小鼠胃异型增生的发生。糖尿病对照组有2例胃癌,而其余组未见胃癌发生。糖尿病对照组病变胃黏膜增殖率明显高于非糖尿病对照组,六味地黄丸及二甲双胍明显降低胃黏膜增殖,表现为胃黏膜Ki67阳性细胞百分比明显下降。与糖尿病对照组比较,六味地黄丸组胰岛素抵抗指数、空腹血糖、血清胰岛素、IGF-1明显降低,胃IGF-1、胰岛素受体mRNA表达明显下调,但IGF-2、IGF-2R mRNA无显著变化,胃组织IGF-1R、AKT磷酸化蛋白表达明显下调,总蛋白不受影响;血清IL-6、TNF-α、胃组织IL-6 mRNA明显下降,胃组织TNF-αmRNA无显著改变;血清脂联素明显增加,瘦素明显降低。二甲双胍组结果与六味地黄丸组类似。体外实验结果表明,低浓度六味地黄丸(8mg/ml)对胃癌细胞增殖无显著影响,中高浓度六味地黄丸(12mg/ml、16mg/ml)明显抑制胃癌增殖。16mg/ml六味地黄丸作用24h胃癌增殖明显下降,并呈时间依赖性。16mg/ml六味地黄丸显著拮抗IGF-1的促胃癌增殖作用。16mg/ml六味地黄丸明显增加胃癌细胞早期凋亡比例及凋亡标志蛋白PARP裂解,并且抑制IGF-1的抗凋亡活性。16mg/ml六味地黄丸明显阻滞细胞周期由S期向G2期进展。六味地黄丸呈浓度依赖性地抑制IGF-1激活的IGF-1R/AKT磷酸化蛋白表达,对MAPK信号包括ERK1/2、P38、JNK磷酸化蛋白无显著影响。结论:体内实验揭示2型糖尿病能明显增加MNU诱导的胃异型增生的发生,六味地黄丸明显降低2型糖尿病小鼠胃异型增生的发生,其降低胃癌风险的作用与其抑制胃黏膜细胞增殖相关。六味地黄丸抑制糖尿病相关性胃癌的机制与减轻胰岛素抵抗、高胰岛素血症,在mRNA及蛋白水平抑制胰岛素/IGF-1/IGF-1R/AKT信号通路的活性,降低血清及组织水平胃癌相关促炎因子IL-6、TNF-α的表达,并且增加血清脂联素、降低瘦素水平有关,部分抗癌机制类似于二甲双胍。体外实验进一步表明六味地黄丸能抑制胃癌细胞增殖、阻滞细胞周期进展、促进凋亡,其抗增殖机制与其抑制IGF-1/IGF-1R/AKT信号通路有关,与MAPK信号通路无关。