论文部分内容阅读
目的：观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对缺氧缺血性脑损伤（ HIBD）新生大鼠海马组织中基质金属蛋白酶2（ MMP-2）及整合素β1（integrin-beta1）表达的影响，探讨EPO对HIBD大鼠神经保护作用的可能机制，为EPO临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供实验及理论依据。 方法:将144只7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD模型组、rhEPO治疗组，HIBD组及rhEPO治疗组均采用改良Rice法制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型，假手术组不结扎颈总动脉也不行缺氧处理，造模后EPO组按5000IU/kg腹腔注射rhEPO，其余两组分别注射等体积生理盐水。每组于给药后6h、24h、3d、7d各处死12只，其中6只灌注固定制备病理切片行HE染色及免疫组化检测MMP-2蛋白表达，另外6只冰浴取海马组织，实时荧光定量（RT-qPCR）测定MMP-2及整合素β1mRNA表达，Western-blot测定整合素β1蛋白表达。SPSS20.0统计软件对数据进行统计分析，P<0.05为差异用统计学意义。 结果：1.脑组织病理改变：假手术组海马区脑组织结构及神经元层次清楚，排列整齐紧密，HIBD组6h、24h及3d可见细胞水肿，空泡变性，海马区结构紊乱，神经细胞稀疏，3d及7d可见细胞坏死，数量减少，EPO组病变较HIBD组明显减轻。2.免疫组化：假手术组海马区MMP-2蛋白呈低水平表达，HIBD组及EPO组各时间点MMP-2蛋白表达均呈增高趋势，且均在7d时表达达高峰，每组各时间点比较差异有统计学意义（P均<0.05）；三组间相同时间点比较，除6 h外，与假手术组相比，差异均有统计学意义（P<0.05），且 EPO组7d与 HIBD模型组比较明显增高（P<0.05）。3.Western-blot结果：假手术组的海马区整合素β1蛋白呈低水平表达，HIBD组整合素β1蛋白表达先增高后降低，差异有统计学意义（P<0.05）；EPO组各时间点整合素β1蛋白表达分别在24h及7d达高峰，且7d峰值较24h高，但差异无统计学意义（P>0.05），三组间相同时间点比较，HIBD模型组24h及3d、EPO组24h、3d、7d与假手术组相比均升高（P<0.05）；且EPO组7d时较HIBD模型组明显升高（P<0.05）。4.RT-qPCR结果：假手术组及EPO组MMP-2mRNA与蛋白表达结果相符，HIBD组各时间点MMP-2mRNA表达量呈“双峰”改变，分别在24h及7d达高峰，且7d峰值较24h高，但差异无统计学意义（P>0.05），各时间点组间比较 MMP-2基因表达较假手术组均明显升高（P<0.05）且EPO组在24 h时表达低于HIBD组，在7 d时则高于HIBD组（P均<0.05）；假手术组、HIBD组及 EPO组整合素β1基因表达趋势与蛋白表达趋势相符。三组间相同时间点比较，除HIBD组7d与假手术组比较差异无统计学意义（P>0.05）外，HIBD组及EPO组各时间点整合素β1基因表达与假手术组相比均明显升高（P<0.05），且EPO组在7 d时明显高于HIBD组，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论：1.外源性应用rhEPO可以减轻HIBD新生大鼠脑组织病理损伤程度，起到一定的神经保护作用。2.rhEPO可在 HIBD恢复期上调MMP-2及整合素β1的表达，这可能是其对HIBD的神经保护作用机制之一。