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临床实践发现,中风病急性期患者常表现出火热夹瘀之象,除中风主症外,常兼见发热、面红、腹胀、小便短赤、大便燥结、舌质红绛或紫黯、苔黄燥等,严重者可发展为高热、烦躁或昏迷,火、瘀表征明显。瘀热的产生,多由素体肝肾不足,加之内伤积损、气机不畅,致邪热内生;气血壅滞脑窍,气滞、血瘀等病理产物留滞不去、郁而化热;瘀血和火热两者相互搏结,损伤脑络,滞碍神机,形成瘀热阻窍之证。故中风病急性期的治疗,当以清热解毒、活血通络为关键。现代中成药制剂苦碟子注射液,主要成分为腺苷、黄酮,具有清热解毒、凉血活血、排脓止痛的功效,已被广泛应用在中风病急性期的治疗当中,可以显著促进患者神经功能缺损的恢复,改善日常生活能力。团队前期动物实验已发现,苦碟子注射液可以抑制大鼠脑梗死后炎症反应,但在细胞水平上,其对脑微血管内皮细胞的抗炎保护机制仍需进一步的研究。核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）是脑梗死损伤后一个重要的炎症反应转录因子,被激活后可与DNA位点结合,介导多种炎症介质相关基因的表达,由此产生瀑布式的炎症级联反应,被认为是脑梗死损伤后一系列炎症反应的“总开关”。本实验以苦碟子注射液为研究对象,以大鼠脑微血管内皮细胞（rat brain microvascular endothelial cells,RBMEC）为载体,建立氧糖剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）细胞损伤模型,模拟在体缺血再灌注损伤,以炎症反应的关键转录因子——NF-κB为切入点,在细胞水平上,研究苦碟子注射液对脑微血管内皮细胞缺血再灌注损伤炎症反应的调控机制。[目的]建立氧糖剥夺/复氧细胞模型,探究缺血再灌注损伤后脑微血管内皮细胞活力的动态变化,研究苦碟子注射液对缺血再灌注损伤脑微血管内皮细胞中NF-κB表达的影响,并进一步阐释清热活血法治疗中风瘀热证可能的炎性作用机制。[方法]体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,采用氧糖剥夺/复氧的方法建立细胞损伤模型,先在培养装置中通入95%N2、5%CO2混合气体,并将培养基置换为无糖Kreb’s液,使细胞在缺氧缺糖环境下培养6小时,再将细胞置于95%空气、5%CO2、正常培养基的正常培养条件下进行复氧复糖,建立氧糖剥夺/复氧诱导的细胞损伤模型。分为三组:正常组、氧糖剥夺/复氧模型组,苦碟子注射液组。苦碟子注射液组于缺氧开始时加入不同浓度苦碟子注射液进行干预。首先MTS法检测细胞活力,筛选最佳时效和量效。细胞缺氧缺糖6 h后,分别复氧复糖0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h,MTS法测定细胞活力,筛选造模最佳时效点。从缺氧开始分别予模型细胞2%、4%、8%浓度的苦碟子注射液,MTS法测定细胞活力,筛选药物最佳量效。采用免疫荧光染色法观察各组NF-κB表达,western blot法分别检测各组总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白中NF-κB蛋白表达量。[结果]1、氧糖剥夺6 h/复氧各时间点组与相应正常组相比,细胞活力显著降低（P<0.01）;随着复氧时间延长,细胞活力呈先下降再上升趋势,其中氧糖剥夺6h/复氧3 h（0GD6 h/R 3 h）细胞活力最低,细胞损伤最严重,故确定模型为OGD 6 h/R 3 h。2、与OGD 6 h/R 3 h模型组相比,苦碟子注射液各浓度组（KDZ 2%、4%、8%）细胞活力均明显上升（P<0.01,P<0.05）,其中,KDZ 4%细胞活力最高。3、免疫荧光染色观察NF-κB的表达:与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组NF-κB表达显著增加（P<0.01）;与OGD 6 h/R3 h组相比,KDZ 4%组NF-κB表达显著降低（P<0.01）。4、western blot法检测NF-κB蛋白表达量:（1）细胞总蛋白中NF-κB蛋白表达:与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组总蛋白中NF-κB蛋白表达增加（P<0.05）;与OGD 6 h/R 3 h组相比,KDZ 4%组总蛋白中NF-κB蛋白表达降低（P<0.05）。（2）细胞胞浆蛋白中NF-κB蛋白表达:正常组、OGD 6 h/R 3 h组、KDZ 4%组胞浆蛋白中NF-κB蛋白表达无显著差异（P>0.05）。（3）细胞核蛋白中NF-κB蛋白表达:与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组核蛋白中NF-κB蛋白表达增加（P<0.01）;与OGD 6 h/R 3 h组相比,KDZ 4%组核蛋白中NF-κB蛋白表达降低（P<0.01）,具有显著的统计学差异。[结论]1、缺血再灌注后大鼠脑微血管内皮细胞活力呈现动态变化,随着再灌注时间延长,细胞活力呈先下降再上升趋势,且在细胞损伤最重的OGD 6 h/R3 h时间点存在NF-κB蛋白的异常高表达。2、苦碟子注射液可以下调缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞中NF-κB蛋白的异常高表达,并可以一定程度上抑制NF-κB的活化,减少NF-κB的核内转移。3、苦碟子注射液清热活血治疗中风瘀热证的作用机制可能与调节脑缺血再灌注损伤后的炎症反应有关。