基于microRNAs调控的轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证的生物学研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:zhangqing1226
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目的研究轻度慢性乙型病毒性肝炎及轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证特异表达的microRNAs谱,探索慢性乙型病毒性肝炎的发病机制及轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证发生的分子生物学基础。方法参照《病毒性肝炎防治方案(2000年修订)》、《慢性乙型肝炎防治指南2005版》及《病毒性肝炎中医辨证标准(试行)》(1991年天津会议制定),在成都市传染病医院及四川省中医院2012年4月-2012年12月期间肝病门诊病人中收集轻度慢性乙型病毒性肝炎无症状患者(10例)、轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证患者(10例)为观察组,以健康志愿者5例为对照组。采取其外周血10ml经离心分离血浆后,用冻存管分装、标记并置于-80℃冻箱中保存。及时并严格按标本保存要求空运至上海伯豪生物技术有限公司,经样品RNA质检合格后提取总RNA,借助Agilent Human miRNA8×60k微阵列芯片技术经过一系的样品标记、杂交、芯片洗涤、芯片扫描及芯片数据提取等芯片实验后,检测出每组样品microRNAs的表达水平。对所得数据运用SPSS19.0软件及在线SAS系统分析,求得各组间的差异表达microRNAs谱(p<0.05),选出表达差异在2倍以上的microRNAs,借助TargetScan (V5.2)软件预测其靶基因并行功能富集分析。结果(1)经在线SAS系统分析,得出轻度慢性乙型病毒性肝炎患者与健康正常人间总的差异表达microRNAs共59条(p<0.05),30条上调,29条下调;其中显著性(2倍以上)差异表达的microRNAs32条,上调12条,预测其靶基因共1107个,通过GO分析其功能主要涉及核苷三磷酸酶调节活性、转录因子活性、核苷酸结合、蛋白结合等生命过程;下调20条,预测其靶基因共1680个,通过GO分析其功能主要涉及转录因子活性、酶调节活性、转移酶的活性、酶的激活剂活性、基因沉默、组织重构、细胞间信号的产生、核苷酸结合、蛋白结合、色素沉着等生命过程。(2)轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证与轻度慢性乙型病毒性肝炎无症状患者间总的差异表达microRNAs共60条(p<0.05),26条上调,34条下调;其中显著性(2倍以上)差异表达的microRNAs23条,上调10条,预测其靶基因共500个,通过GO分析其功能主要涉及转录因子活性、免疫系统的发育、转运活动、细胞粘附等生命过程;下调13条,预测其靶基因共499个,通过GO分析其功能主要涉及转录因子活性、转移酶的活性、核酸结合、蛋白结合、转运、免疫系统的发育等生命过程。结论轻度慢性乙型病毒性肝炎与轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证患者均有其特异性表达的microRNAs谱,并从microRNAs角度探讨了轻度慢性乙型病毒性肝炎与轻度慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证发生的新机制,为基于“病”-“证”结合模式的慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证的本质研究奠定基础。
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