目的及意义据世界卫生组织统计,到2030年,全球将有约2360万人死于心血管疾病[1]。心律失常是最常见的心血管疾病之一,为心源性猝死的主要诱因。临床根据发生机理和表现不同主要分为传导异常、激动形成异常、形成和传导异常并存及起搏器引起的心律失常4大类。室性期前收缩(Ventricular Premature Beat,VPB)属于激动形成异常,简称室性早搏,是指在窦性激动未到达前提前收缩,产生异常自律,控制心脏活动,从而诱发冠心病、心源性猝死等[3],严重影响人们的生活及健康。益气复脉处方来源为北京中医药大学东方医院心内科的协定处方,由党参、丹参、黄连、赤芍、远志、甘草等11味药组成,用于治疗室性期前收缩心律失常,经多年临床实践,疗效显著。药理研究表明该方具有抗乌头碱、氯化钙、异丙肾所致的心律失常,作用机制与抑制平台期钙离子电流和复极后期钾离子电流有关[2]。该方临床以汤剂形式给药,但汤剂携带不便、易发霉变质、口感差,只适合小量生产,且质量难以控制,故本文以中医药理论为指导结合现代制药技术,按照新药注册相关要求,将其开发成颗粒剂,研究了益气复脉的制备工艺及质量标准。研究方法本文对益气复脉颗粒的制备工艺和质量标准两个方面进行了研究。具体内容如下:1.益气复脉颗粒的制备工艺研究首先建立了高效液相色谱法同时测定芍药苷、甘草苷、甘草酸三种成分的方法及小檗碱含量测定的方法,通过大鼠心肌缺血再灌注和哇巴因致豚鼠心律失常两个药理实验及指标性成分的含量测定结果对全方水提、全方水提醇沉、部分药味水提醇沉和部分药味醇提、部分药味水提和部分药味醇提四种工艺路线进行了比较。然后应用正交试验法对确定的工艺路线进行了工艺参数的优化,考察了溶剂、提取时间、提取次数对指标成分含量的影响;应用单因素考察确定了干燥的工艺条件;通过对成型工艺考察确定了益气复脉的制粒工艺。2.益气复脉颗粒质量标准研究按照《中国药典》对颗粒剂质量要求,建立了益气复脉颗粒的质量标准。采用薄层鉴别技术对党参、黄连、法半夏、远志、酸枣仁、川芎六味药进行了定性鉴别;应用高效液相色谱法建立方中指标成分芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA含量测定方法及限度;按照《中国药典》四部颗粒剂通则要求,建立益气复脉颗粒的检查项目。实验结果1.益气复脉颗粒的制备工艺研究工艺路线筛选结果表明,党参、赤芍、法半夏、炙甘草等水提和丹参、黄连、远志、酸枣仁等醇提较其他工艺药理指标相对较优,并且指标成分隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、芍药苷、甘草苷和甘草酸的含量较高,故选择党参等六味药水提,丹参等五味药醇提。通过工艺参数优化和成型工艺研究,最终确定了益气复脉颗粒的制备工艺为:党参、赤芍等六味药加水煎煮三次,第一次加入10倍量水,提取1.5 h,滤过;第二次加入8倍量水,提取1.5h,滤过;第三次加入8倍量水,提取1.5h,滤过,合并三次水煎液,浓缩至相对密度为1.18(55 ℃),80 ℃干燥。丹参、黄连等五味药用60%乙醇加热回流提取两次,第一次加入10倍量,提取2.0 h,滤过;第二次加入9倍量,提取2.0 h,滤过,合并两次滤液,浓缩至相对密度为1.18(50 ℃),70 ℃干燥。该工艺的出膏率约为35.65%。合并水提和醇提浸膏,粉碎,过80目筛,按照药辅比例1:1～0.75加入糊精,以90%乙醇作为润湿剂制成颗粒,包装。2.益气复脉颗粒质量标准研究对党参、黄连、法半夏、远志、酸枣仁、川芎六味药进行了薄层定性鉴别。含量测定方法研究结果为以流动相A为乙腈,B为0.05%磷酸,作梯度洗脱。洗脱条件如下:0～36 min 92%B,36～38 min 92→86%B,38～44 min 86%B,44～46 min 86%→81%B,46～70min81%B,70～72min81%→66%B,72～94min66%B;94～97 min66→35%B;97～110min35%B;110～115min35→92%B;流速 1.3mL min-1;芍药苷检测波长为230nm;丹酚酸B检测波长286nm;丹参酮ⅡA检测波长为270nm;柱温为30 ℃;进样体积为10 μl。实验结论本课题对益气复脉颗粒的提取和成型工艺进行了研究,建立了稳定、可行的颗粒剂的制备工艺;定性鉴别了益气复脉颗粒中的药味,定量测定了主要药效成分的含量,检查项目符合相关要求,可为后期益气复脉的质量控制提供依据。