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大豆疫病是大豆的重要病害之一,在世界范围内造成严重经济损失。防治大豆疫病最有效的方法是利用抗病或耐病品种。因此,不断发掘和鉴定大豆抗疫病新基因对防治该病害具有重要意义。1.鉴定了野生大豆资源对大豆疫病的抗病性和耐病性,以期在野生大豆中发掘优异抗源。用苗期子叶贴菌块方法鉴定104份野生大豆资源对两个不同毒力的大豆疫霉菌株PSJS2(毒力型:1a,1b,1c,1d,1k,2,3a,3b,3c,4,5,6,7,8)和PS41-1(毒力型:1a,1d,2,3b,3c,4,5,6,7,8)的抗性。结果表明,33份资源抗PS41-1,35份资源抗PSJS2,其中18份抗两个菌株。在抗病性鉴定基础上,用菌层接种方法对选择的82份资源进行耐病性鉴定,发现7份高耐病性资源。这些结果表明,野生大豆中可能含有新的大豆疫病抗病和(或)耐病资源,这些抗病或耐病资源可以用于未来大豆抗病育种,以丰富大豆对大豆疫病的抗性遗传基础。2.以抗疫病大豆品种早熟18为父本、感病品种Williams为母本杂交产生的232个F2:3家系为作图群体,基于早熟18中抗疫病基因Rps ZS18初定位结果,在大豆基因组目标基因区域内开发SSR标记对Rps ZS18进行精细作图,最终将Rps ZS18定位于大豆2号染色体上SSR标记ZCSSR33(0.5 c M)和ZCSSR46(0.9 c M)之间,标记Satt172与Rps ZS18共分离。标记ZCSSR33和ZCSSR46在2号染色体上的物理距离为112.6 kb,在该区域内进行候选基因分析,发现基因模型Glyma.02g246000是具有典型抗病基因结构的Ser/Thr蛋白激酶结构类型,确定其为候选基因。通过序列结构分析,发现早熟18和Williams候选基因位点在DNA和c DNA上存在着多个SNP位点基于候选基因序列差异开发一个Indel标记ZCIndelzs18,并进行群体验证,证明ZCIndelzs18与Rps ZS18分离。两个共分离标记的开发为Rps ZS18分子辅助选择育种提供有效的工具。3.将早熟18及其具有亲缘关系的25个大豆品种分别接种8个不同毒力的大豆疫霉菌株,获得不同品种的抗性反应型,没有发现与早熟18具有相同反应型的大豆品种。对不同品种的Rps ZS18候选基因位点进行测序分析,发现该区域存在丰富的多样性,但编码区序列相对保守,共存在13个单倍型。用于开发Indel标记的缺失在抗病和感病品种中都有出现,不是有效的功能突变位点,位于早熟18中候选基因C-末端存在8个集中的SNP以及一个碱基的插入,造成蛋白质C-端第463位的谷氨酸(Glutamic acid)突变成天冬氨酸(Aspartic),以及第465-469位的氨基酸发生突变,这些突变位点在25个相关品种中并未发现,并且通过抗性反应型比对并未发现与早熟18具有相同反应型的品种,这些位点可以用于开发Rps ZS18的功能标记,为标记辅助选择病育种奠定基础。