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缺血性卒中是危及人类生命健康的主要疾病之一,其发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高,然而目前治疗方法很有限,临床上仍缺乏合适的神经保护剂减轻卒中后脑损伤,因此寻找和发现新的治疗靶点是目前脑血管病研究的热点。近年来研究表明缺血性卒中后的炎症反应具有级联放大效应,是导致脑缺血性损伤的重要因素,故针对炎症反应加以干预可能成为治疗缺血性卒中新的有效途径。第一部分人尿激肽原酶治疗急性轻中度脑梗死患者的研究目的:在我们实验室前期研究的基础上研究人尿激肽原酶对急性轻中度脑梗死患者的保护作用,并且探讨其能否抑制卒中后炎症反应。材料与方法:我们纳入2008年9月至2011年5月我院神经内科收治的发病72小时以内的急性脑梗死患者,意向性分为实验组和对照组,两组接受相同的基础治疗方案,激肽原酶使用时间为10天,对各组患者一般资料、伴随危险因素进行比较以确定资料的可比性。对治疗过程中不良反应进行比较以评估其安全性。在第12天和3个月时进行相应的NIHSS和ADL评分。在治疗前后抽取患者静脉血,用ELISA方法检测患者血清中炎症因子表达情况。结果:各组患者一般资料、伴随危险因素等无明显差异,具有可比性。治疗12天时两组的NIHSS、ADL评分都较治疗前明显好转,并有统计学意义,同时实验组评分(NIHSS 评分:从 8.13±0.39 减至 4.75±0.35;ADL 评分:从 48.06±2.14增至 66.78±2.19)好于对照组(NIHSS 评分:从 7.98±0.45 减至 5.31±0.44;ADL评分从49.87±2.32增至63.89±2.49),但是两组间比较无统计学意义。对两组评分差值进行比较发现,实验治疗组对患者评分的改善程度(NIHSS评分差值3.38±0.26,ADL评分差值18.72±1.74)明显优于对照组(NIHSS评分差值2.67±0.22,ADL评分差值14.02±1.30),并且有统计学意义。12天时两组有效率分别为70.43%和55.56%,具有统计学意义(P<0.05)。3个月时随访发现实验组和对照组 ADL 评分(80.65±1.91 vs 74.24±2.35,P<0.05)、ADL 评分差值(32.59±1.70vs 24.37 ±1.43,P<0.01)及有效率(80.00%vs 61.11%,P<0.01)均有显著性差异。两组在不良反应方面无明显差异。常规治疗组和HUK组在治疗前IL-1β和TNF-α水平都明显高于正常对照组,经12天治疗后两组患者与治疗前相比均有显著性下降,并且HUK组的差异性更明显,同时HUK组TNF-α和IL-1β的治疗前后差值明显优于常规治疗组(P<0.05)。结论:激肽原酶能够抑制急性脑梗死患者体内的炎症反应,进而发挥神经保护作用。第二部分靶向抑制HDAC6保护缺血性脑损伤的研究目的:研究靶向抑制HDAC6对小鼠缺血性脑损伤的保护作用及其可能机制。材料与方法:1、应用线栓法建立一侧大脑中动脉缺血模型(MCAO),通过监测术前术后血压、血糖、心率、血气分析等生理指标的变化评估MCAO安全性。用RT-PCR和Western blot方法检测再灌注不同时间点小鼠缺血侧大脑皮层中HDAC6的表达情况。2、针对HDAC6基因设计合成shRNA序列,构建HDAC6 shRNA慢病毒表达载体,然后扩增、DNA测序。将测序鉴定结果正确的HDAC6 shRNA重组慢病毒质粒与包装质粒共同转染293T细胞包装慢病毒,并对包装收集的病毒液浓缩及滴度测定。用病毒液感染神经元后,用RT-PCR和Western blot方法筛选出具有最佳干扰效率的靶点序列。3、慢病毒通过侧脑室注射预处理小鼠,3天后行MCAO术。神经功能评分评价神经功能缺损程度,干湿重法测定脑含水量,TTC染色检测脑梗死体积,qRT-PCR和Western lot检测炎症因子mRNA和蛋白水平的表达。4、Western Blot测定各信号通路蛋白的表达情况。结果:1、MCAO术前与术后血压、血糖、心率、血气分析等生理指标无明显改变;再灌注后3h、6h和24h小鼠缺血侧大脑皮层中HDAC6mRNA和蛋白水平表达量都有所升高。2、成功构建了 HDAC6shRNA慢病毒,经感染神经元后,筛选出具有最佳干扰效率的靶点序列进行后续实验。3、靶向抑制HDAC6能够明显改善小鼠缺血后的神经功能缺损程度,减轻脑水肿及脑梗死体积。缺血再灌注后,小鼠缺血侧大脑皮层组织中各炎症因子mRNA和蛋白水平表达量都有所增加,而抑制HDAC6后炎症因子的表达较MCAO对照组有所下降。4、缺血再灌注后,小鼠缺血侧大脑皮层组织中MAPK和NF-κB信号通路都被激活,抑制HDAC6能够下调激活的MAPK/p38和NF-κB信号通路;同时,抑制HDAC6能够促进Nrf2及其下游表达增加。结论:靶向抑制HDAC6能够通过抑制炎症反应对缺血性脑损伤起到保护作用,其机制可能与其能够下调MAPK/p38和NF-κB信号通路,上调Nrf2信号通路有关。