稻瘟病菌中3个假定ARF蛋白的功能分析

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ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor, ARF)是小G蛋白Ras超家族的成员,它们是一类大小在20kDa左右的GTP结合蛋白。ARF最初发现作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白α亚基,促使其ADP核糖基化。近年来研究发现,ARF的功能是参与囊泡的运输和肌动蛋白的重组。本文为了研究稻瘟病菌中ARF蛋白的功能,利用稻瘟病菌的数据库和有关生物信息学软件,比较了稻瘟病菌中注释的6个ARF蛋白的同源性。我们构建了MGG01574、MGG04976、MGG08859三个基因的敲除载体,MGG01574和MGG04976的过量表达载体,分别通过转化KU80和GUY11的原生质体,获得了敲除突变体和过量表达突变体。表型分析后发现,MGG01574和MGG04976的敲除突变体与野生型相比没有发生变化,而MGG08859的敲除突变体菌落的生长速度出现明显减慢,只有KU80的50%左右;MGG01574过量表达突变体菌落的生长速度有略微的减缓;产孢量方面,两个过量表达突变体的分生孢子形成都只有GUY11的20%左右。不论是敲除还是过量表达,这三个基因突变体的孢子萌发、附着胞形成和致病性都没有发生变化。以上结果表明,这三个假定的ARF参与了菌丝极性和分生孢子形成阶段,但都不是必不可缺的,其动态平衡可能是重要的,因此过量表达之后反而会抑制了囊泡运输过程。
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