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背景和目的： 肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，男性与女性中肝癌诊断率分别为世界第五和第七，男性及女性肝癌相关死亡率在癌症相关死亡中分别居第二和第六。肝细胞癌占所有肝癌的70％-85％，其诊断和治疗取决于多方面因素——肿瘤的大小，范围，全身和肝功能情况。早期确诊的肝癌患者，才有可能接受肝脏切除或移植等治疗。然而仅有10％-30％的肝细胞癌患者适合根治性治疗，大多数肝细胞癌患者，确诊时已经处于中晚期，无法行根治性治疗，且预后较差。而传统的介入治疗、放化疗存在抗肿瘤效果较差、副作用大等缺点。分子靶向治疗有着良好的肿瘤靶向性，毒副作用也较低，为肝细胞癌治疗提供了新的治疗手段及研究方向;因此，寻找新的药物靶标，开发新的抗肝细胞癌药物具有深远意义。Neuropilin-1(NRP-1)是Semaphorin3A、血管内皮生长因子(VEGF)及多种细胞因子的共受体，参与肿瘤血管新生，肿瘤细胞存活、增殖、侵袭及转移。它在多种肿瘤细胞及组织中高表达，并与多种肿瘤的恶性程度密切相关，被认为是一个很有前景的癌症治疗靶点。为了发展靶向NRP-1的药物，我们实验室前期通过杂交瘤技术制备了一株靶向NRP-1的功能性单克隆抗体(NRP-1 mAb，A6)，本文主要研究NRP-1与肝细胞癌恶性程度的相关性及抗NRP-1抗体对抗肿瘤的活性。 方法： 首先通过PCR检测肝癌细胞Bel-7402，HepG2，SMMC-7721中mRNA表达量，然后通过流式细胞术、Western blotting观察抗体与肝癌细胞的结合能力及NRP-1的蛋白表达量;免疫荧光及细胞化学染色检测NRP-1 mAb的特异性及在细胞表面的定位;免疫组化观察抗体在肿瘤组织中的定位及NRP-1在不同病理学分级肿瘤中表达情况的不同;细胞抑制实验(MTT)和集落形成抑制试验检测NRP-1 mAb对肝癌细胞株增殖的影响;流式细胞术检测NRP-1 mAb对肝癌细胞株凋亡的影响;对荷瘤裸鼠进行NRP-1 mAb治疗，验证其活体内抗肿瘤活性;并通过免疫组化观察治疗后肿瘤内NRP-1和VEGF的表达以及微血管密度的变化;131I标记的NRP-1 mAb在荷瘤裸鼠中的显像检测NRP-1 mAb在肿瘤中的靶向性及特异性。 结果： NRP-1在不同肝癌细胞株中表达量不同，抗体对肝癌细胞有较高的亲和力。免疫荧光及细胞化学染色实验结果显示抗体定位在细胞表面，免疫组化实验结果显示抗体能够特异性的定位在肝癌细胞上并与肝癌的病理学分级、临床分期等具有正相关性。细胞增殖实验、集落形成抑制试验表明NRP-1 mAb对肝细胞癌的生长、集落形成都有一定的抑制作用。细胞凋亡实验结果表明，抗体可诱导肝癌细胞凋亡。动物学实验发现，NRP-1 mAb可以特异性定位于肿瘤位置，并可对肿瘤生长有明显的抑制作用。 结论： 1.NRP-1在肝癌细胞及组织中高表达，并与肿瘤的病理学分级有关，与肿瘤恶性程度相关。NRP-1 mAb可与肝癌细胞及组织上NRP-1特异性结合。 2.NRP-1 mAb可以抑制肝癌细胞增殖、集落形成并诱导凋亡，具有明显的抗肿瘤活性。NRP-1 mAb是一个具有前景的抗肿瘤候选药物。 3.NRP-1 mAb可以特异性定位于荷瘤鼠肿瘤部位并对肿瘤有一定的抑制作用。 4.NRP-1 mAb治疗后的肿瘤，其NRP-1、VEGF的表达以及微血管密度均有减少。