低分子量海带岩藻多糖的制备及其抗肿瘤活性的研究

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岩藻多糖具有多种生物活性,如抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤以及调节免疫功能等。岩藻多糖的生物活性与其结构相关,包括硫酸根含量、单糖组成及比例、分子量大小等。为此,人们对岩藻多糖开展了许多相关的研究,并且逐渐把岩藻多糖的结构分析和生物活性研究相结合,本文对海带岩藻多糖开展了以下几方面的研究工作:1、海带岩藻多糖粗糖的分离纯化及成分分析:购自烟台的粗岩藻多糖经乙醇分步沉淀,获得10.77%的岩藻多糖纯品。分析其化学成分,结果表明,多糖占总糖含量的68.80±0.45%,岩藻糖占总糖含量的30.20±1.44%,蛋白质占总糖含量1.30±0.32%,糖醛酸占总糖含量的11.49±0.64%,硫酸根占总糖含量9.20±1.02%。薄层层析表明其含有D-半乳糖、L-岩藻糖,可能含有D-甘露糖和/或D-阿拉伯糖。气相色谱分析岩藻多糖中的单糖组分为L–岩藻糖,L–阿拉伯糖,D–木糖,D–甘露糖,D–葡萄糖,D–半乳糖。含量分别为31.33%,15.16%,12.83%,10.72%,20.99%,8.97%。2、最高抗肿瘤活性组分的制备及性质鉴定:初步纯化的岩藻多糖经微生物酶解得到具有较低分子量的岩藻多糖FS;经DEAE-Sepharose FF凝胶层析,得到组分F1、F2、F3、F4、F5、F6,MTT法检测获得产物抑制Hep-2肿瘤细胞生长的活性,结果表明:低分子量岩藻多糖F5具有最高的抑制肿瘤生长活性,达到48.05±0.73%,其余组分抑制Hep-2肿瘤细胞生长的能力较弱。采用气相色谱和高效液相色谱对F5组分进行单糖组成和分子量范围进行分析,结果表明, F5含有大量的岩藻糖和少量的L–阿拉伯糖,D–木糖,D–甘露糖,D–葡萄糖,D–半乳糖,其含量分别为42.42%,8.71%,9.28%,11.50%,10.61%,17.48%;F5分子量范围集中在12.107-33.329kDa。同时测得F5的硫酸根含量为16.21%±0.58%。本实验最终获得了主要成分是L-岩藻糖,同时具有较低分子量和较高硫酸酯含量的岩藻多糖组分。3、岩藻多糖抗肿瘤活性的初步分析:MTT实验表明F5的抗肿瘤活性呈现剂量依赖性和时间依赖性,IC50=0.149mg/mL。镜检发现处理的Hep-2细胞在形态表现为染色质浓缩,细胞收缩,出现类似细胞凋亡的现象。单细胞凝胶电泳发现视野中有彗星出现,且随着处理时间的延长,彗星拖尾几率增加,表明F5对Hep-2细胞DNA有损伤,且随F5处理时间的延长,损伤效应增强。
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