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高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic porcine reproductive and resporatory syndrome,HP-PRRS)是严重危害我国养猪业发展的重要疾病之一。采用弱毒活疫苗免疫接种是我国控制PRRS的主要手段。目前国内现有的PRRS活疫苗均采用转瓶培养工艺和常规冻干保护剂进行生产。本研究以HP-PRRSV疫苗株JXA1-R为研究对象,开展了疫苗的细胞悬浮培养工艺和耐热保护剂的研究,并开发出HP-PRRS耐热保护剂活疫苗(简称:高蓝耐热活疫苗)。利用BC-7L型生物反应器,研究了 HP-PRRSV JXA1-R在Marc-145细胞上悬浮培养工艺。通过优化微载体浓度、细胞接种量、搅拌参数、搅拌速度及培养基补给方式,确定了 Marc-145细胞微载体细胞悬浮培养工艺的参数。应用该工艺,Marc-145细胞悬浮培养的细胞峰值密度可达到2～3×106cells/mL。通过优化HP-PRRSV JXA1-R株的接毒时间、接毒剂量、血清浓度、溶氧量、病毒增殖温度等工艺参数确定了 HP-PRRSV JXA1-R株的微载体悬浮培养工艺。应用该工艺,按0.1 MOI接毒剂量、2%血清浓度,40%溶氧量,37℃温度维持培养70～74 h收获,收获病毒滴度均不低于108.0TCID50/mL。开展了 HP-PRRSV JXA1-R悬浮培养工艺的放大和中试生产。HP-PRRSV JXAl-R在BSISL-42L和BC-100L型生物反应器中均可高滴度增殖;3批病毒滴度均>108.0TCID50/mL;以耐热保护剂配方B与冻干曲线4组合制备的3批中试产品的各项检验均符合质量标准要求。3批高蓝耐热活疫苗中试产品的安全、效力试验结果表明:3批产品均安全;免疫14日龄与28日龄仔猪,免疫后28 d攻毒均能有效保护。用高蓝耐热活疫苗免疫4-6周龄仔猪,28 d后用2010-2012年分离的HP-PRRSV 3个流行毒株分别攻毒。结果表明;疫苗对2010～2012年分离的流行代表毒株均具有良好的免疫保护。将3批高蓝耐热活疫苗于2～8℃分别保存21个月后按照产品质量标准进行检验,各项质量指标均符合要求,将疫苗保存期定为2～8℃,18个月。比较了高蓝耐热活疫苗与同类产品的安全性和效力。结果显示其与同类制品无明显差异。分析了高蓝耐热活疫苗对猪瘟疫苗免疫的影响。结果表明:超剂量免疫(10头份/头)组和单剂量免疫组,与仅免疫猪瘟疫苗对照组相比,高蓝耐热活疫苗组在猪瘟抗体产生的时间及水平均无明显差异。综上所述,本研究确定了 HP-PRRSV的悬浮培养工艺和耐热冻干工艺,并制备山安全、有效、质量可控的高蓝耐热活疫苗,为我国猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了新的疫苗制品。