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[目的]Polo样激酶1(polo-like kinase 1,PLK1)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在调节细胞周期、维持基因组稳定和修复DNA损伤中起重要作用。研究表明PLK1在人类多数肿瘤中高表达,我们前期实验也发现EBV转化淋巴母细胞中PLK1表达上调。本实验通过体外细胞实验及动物实验,观察RNA干扰PLK1表达对淋巴瘤Raji细胞增殖、迁移侵袭、细胞周期和凋亡以及裸鼠移植瘤形成等生物学行为的影响,研究PLK1在EBV相关淋巴瘤发生中的作用,为淋巴瘤的分子机制研究与靶向治疗提供实验依据。[方法]构建针对PLK1基因的慢病毒干扰载体p Len R-GPHh PLK1-sh,建立PLK1稳定低表达的Raji细胞系,倒置荧光显微镜观察细胞内绿色荧光情况,经过q RT-PCR及Western Blot技术验证PLK1干扰效果。采用CCK-8、流式细胞术、迁移侵袭实验及裸鼠成瘤实验,观察PLK1表达改变前后淋巴瘤Raji细胞生物学行为的变化。[结果]1.成功建立PLK1稳定低表达的Raji细胞系。重组质粒酶切电泳结果与预期相符,质粒测序结果经BLAST比对显示,目的基因的干扰质粒p Len R-GPH-h PLK1-sh与设计的干扰序列吻合率达100%,证明载体构建成功;荧光显微镜观察显示转染组携带绿色荧光的细胞数达80%;q RT-PCR、Western Blot检测表明转染p Len R-GPH-h PLK1-sh质粒的细胞(干扰组,Raji/PLK1 sh RNA)较转染p Len R-GPH的细胞(空载体组,Raji/GPH)和普通Raji细胞(空白组)相比,PLK1基因的m RNA表达及蛋白水平均明显降低,表明成功建立PLK1稳定低表达的Raji细胞系。且干扰组PLK1-SH1中PLK1 m RNA水平下降更为明显,提示干扰效果最好,所以选取PLK1-SH1组进入后续实验。2.干扰PLK1表达可抑制淋巴瘤Raji细胞的增殖、迁移侵袭能力,诱导G2期阻滞和凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的形成。CCK-8结果显示:干扰组较空载体组及空白组相比,生长速度慢,且差异具有统计学意义(P<0.01),表明干扰PLK1表达可抑制Raji细胞的增殖。迁移侵袭实验结果显示:干扰组较空载体组及空白组相比,迁移细胞数较少,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组穿过Matrigel基质胶的细胞数明显少于空载体组及空白组,差异有统计学意义(P<0.01),表明干扰PLK1的表达可抑制淋巴瘤Raji细胞的迁移和侵袭能力。流式细胞术结果显示:干扰组较空载体组及空白组相比,G2期细胞百分比显著升高,G1期细胞百分比降低(P<0.01);细胞早期凋亡率明显升高(P<0.01),差异有统计学意义。表明干扰PLK1表达可诱导淋巴瘤Raji细胞G2期阻滞和凋亡。裸鼠成瘤实验结果显示:空载体组及空白组各组成瘤率达80%;而干扰组成瘤率为0%。干扰组相比于对照组,裸鼠成瘤率明显下降,这提示干扰PLK1的表达,对裸鼠移植瘤的形成有显著抑制作用。[结论]干扰PLK1的表达可抑制淋巴瘤Raji细胞增殖、迁移侵袭及移植瘤形成,诱导凋亡与周期阻滞。