宁夏锁阳多糖的提取工艺、体外抗氧化及结构分析研究

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锁阳属于全草类单科单属植物,别名锈铁棒等,它是寄生性种子植物。锁阳的药用部分为其去花序干燥茎,在中国气候干旱荒漠区分布较为普遍,诸如宁夏、内蒙古等地。锁阳又叫“沙漠人参”、“不老药”、“金不换”,具有助阳益肾,固精血,润肠通便,抗衰老等一系列医药学功效。经查阅文献,近年来有关锁阳化学成分方面的研究报道较少。本试验选用宁夏锁阳通过水提醇沉法得到其粗多糖,再对粗多糖进行分离纯化、结构鉴定。此外,还对锁阳多糖进行体外抗氧化活试验探究。本论文主要研究结果如下:(1)使用传统水提醇沉的方法提取锁阳粗多糖,并且在单因素试验基础上,通过响应曲面法对提取工艺进行优化,得二次多元回归模型方程:Y=21.81+0.36×X1+0.41×X2-0.30×X3+0.31X1×X2-0.26×X1×X3+0.44×X2×X3-0.82×X1 2-0.35×X22-0.84×32。优化后的工艺参数为:浸提温度90℃,浸提取时间2.5h,料液比1:25 (w/v=g/mL)。在此条件下,试验验证锁阳多糖的实际提取率为22.07%。(2)锁阳多糖的体外抗氧化试验结果表明,其具有一定的总还原能力并且对3种自由基(DPPH·、O2-、·OH)均显示出一定的清除作用,且其抗氧化活性强弱与其质量浓度的大小有关。(3)通过(DEAE-52)纤维素柱层析分离,得到不同组分多糖,再经过(SephadexG-100)葡聚糖凝胶柱层析分离,进步纯化,得到均一组分SCP-Ⅰ、SCP-Ⅱ、SCP-Ⅲ和SCP-Ⅳ,高效液相色谱法(HPLC)验证为均一多糖组分。(4)应用高效液相色谱(HPLC)分析计算得到均一多糖组分SCP-Ⅰ、SCP-Ⅱ、 SCP-Ⅲ、SCP-Ⅳ的分子量分别为2.89×104Da、1.95×104Da、2.28×104Da、2.41×104Da。(5)利用傅里叶变换红外光谱(IR),确定SCP-Ⅰ为β-吡喃糖糖苷键构型;SCP-Ⅱ、SCP-Ⅲ、SCP-Ⅳ为α-吡喃糖苷键构型。(6)应用环境扫描电子显微镜(SEM)对四种均一多糖进行电镜扫描观察,分别在×1000、×2500倍率下进行内部结构扫描得到的四种均一多糖中均含有片状、球状及颗粒状成分。
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