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第一部分:延胡索酸类似物对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用目的研究延胡索酸类似物预处理心肌细胞后,对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用方法乳鼠心肌细胞原代培养,以不同的延胡索酸类似物在建立心肌细胞缺血再灌注前预处理心肌细胞,建立乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,检测所建立模型细胞中总LDH漏出量并进行对比。结果正常组中,心肌细胞只有极少量的LDH漏出;缺氧复氧后,心肌细胞内LDH大量外漏;与正常组比较,差异非常显著。三种内源性小分子代谢物在25-200 mg/L,浓度依赖地抑制LDH漏出,其中在较高剂量下,作用均很显著,其中作用最为突出的是L-苹果酸,在200mg/L剂量时与D-苹果酸、草酰乙酸比较均具有统计学意义。结论延胡索酸的类似物对心肌细胞的缺氧复氧损伤具有保护作用,效果与药物浓度密切相关,其中L-苹果酸的保护作用最为显著。第二部分L-苹果酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用目的L-苹果酸预处理大鼠后,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,在体实验研究不同剂量L-苹果酸预处理大鼠血流动力学变化,及大鼠心肌梗死面积,进一步研究L-苹果酸在不同剂量下对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法L-苹果酸预处理大鼠后,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,在体实验研究不同剂量L-苹果酸预处理大鼠血流动力学变化,记录大鼠左心室内压(LVSP),左心室内压最大变化速率(±dp/dt-max)以及左心室舒张末期压力(LVEDP),大鼠心肌缺血再灌注180min后,分离取血清。测定各项指标:乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(CTN-I)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)以及大鼠心肌梗死面积,进一步研究L-苹果酸在不同剂量下对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。结果L-苹果酸预处理大鼠后,大鼠左心室收缩末期压力(LVSP)和左心室内压最大变化速率(±dp/dt-max)明显升高,左心室舒张末期压力(LVEDP)明显降低,大鼠肌钙蛋白I(CTn-I)和乳酸脱氢酶(LDH)含量显著降低,血清超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性明显升高,明显减小心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌缺血梗死范围,减小心肌梗塞面积;L-苹果酸在180mg/kg到240mg/kg之间减小心肌缺血梗死的效果最为显著。结论L-苹果酸预处理的大鼠相比较对照组,在心肌缺血再灌注损伤后,对大鼠心肌有明显的保护作用,而且与药物的剂量呈正相关,180mg/kg—240mg/kg浓度的L-苹果酸对心肌保护的效果最佳。第三部分L-苹果酸对于心肌缺血再灌注损伤的可能机制目的在体实验研究L-苹果酸对于心肌缺血再灌注损伤的可能机制方法选择第二部分中240mg/kg浓度的L-苹果酸预处理组大鼠,待心肌缺血再灌注损伤3h后处死大鼠,取出大鼠心肌组织。Western Blot方法检测心肌组织中总的Nrf2含量及Nrf2的核转移,Keap1的表达以及下游的NQO1,HO-1的表达。结果与对照组相比,DMF和LM组细胞总蛋白和细胞核蛋白中Nrf2水平明显升高,结果具有非常显著差异,提示LM可促进心肌细胞Nrf2的表达和促进其核转移;而Nrf2的表达及核转移的增加可上调多种抗氧化酶的表达,如HO-1,NQO1。缺血再灌注后,LM预处理组心肌组织中的HO-1,NQO1蛋白水平明显增加,结果具有非常显著差异;而Keap1作为Nrf2的特异性的抑制蛋白,在LM预处理模型心肌中,表达下调,结果具有非常显著差异。结论LM促进心肌组织中Nrf2表达及核转移,进而增强HO-1,NQO1基因的转录及表达,从而对抗缺血再灌注损伤。Keap1的抑制至少是其效应的机制之一,通过抑制Keap1,减少Nrf2的泛素化降解,进而促进Nrf2及下游的蛋白的表达增强,减少心肌的缺血再灌注损伤。