论文部分内容阅读
研究背景脑血管疾病(CVD)是神经系统的常见病和多发病,严重威胁着人类的生命健康。缺血性脑损伤可致选择性和迟发性的CA1区锥体神经元凋亡,导致动物和人类的神经功能缺失。大部分CVD存活者遗留不同程度的神经功能障碍,给社会和家庭带来沉重负担。女性在绝经期前发生脑卒中的风险较同龄男性低,但绝经后其脑卒中的发病率与同龄男性相仿,孕激素替代疗法可降低绝经期妇女脑卒中发生的风险,大量基础及临床实验证实,孕激素(PROG)具有神经保护作用。孕激素是一种甾体类固醇激素,由卵巢和肾上腺分泌,其神经保护作用机制包括经典的受体依赖机制和非受体依赖机制。其中,与靶器官中的孕激素受体结合是其在脑内最主要的作用途径,通常认为孕激素进入细胞后与其受体结合,受体蛋白发生构型变化后,与DNA的性激素作用元件结合,调节相关基因表达,产生不同效应。有实验表明,在全脑缺血模型中,孕激素可改善大鼠的神经功能缺失状况。然而,在临床上,局灶性脑缺血的发病率要远远大于全脑缺血,而且因缺血方式的差异,神经元的凋亡路径不同,其神经功能缺失状况也相差甚远。因此,研究孕激素在局灶性脑缺血模型中的神经保护作用及其机制,具有重要的理论意义和临床应用价值。研究目的本实验将健康成年SD雄性大鼠按随机化原则分组,阻断其单侧大脑中动脉后给予孕激素治疗,观察大鼠缺血后的神经功能评分、脑梗死面积比、PKCβⅡ和NF-κB p65的表达情况及IP3含量的变化情况,探讨孕酮的神经保护作用,并分析其可能机制。研究方法1、动物模型制备采用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞模型,根据实验需要在一定的缺血时间(2h)后行拔线再灌注,以获得实验所需的MCAO模型。2、神经功能评分参照Zea Longa的评分方法,在处死大鼠前观察并记录神经功能缺失症状。3、TTC染色使用TTC染色的方面结合计算机图像分析软件计算梗死区脑组织的面积比例。4、免疫组织化学在形态学上观察PKCβⅡ和NF-κB p65表达的部位,对蛋白表达情况进行分析。5、酶联免疫吸附试验对各组大鼠脑组织中的IP3含量进行定量分析。6、统计学处理数据以均数±标准差(x±s)表示,多组样本均数的比较采用方差分析,两样本均数比较采用t检验。采用SPSS13.0统计软件分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果实验结果显示,给予孕酮(8mg/kg)治疗后大鼠脑梗死面积比例明显小于溶剂组;孕酮可改善雄性大鼠的神经功能缺失症状;溶剂组脑梗死侧的IP3含量显著低于假手术组和正常对照组,孕酮组脑梗死侧的IP3含量高于溶剂组;大鼠脑缺血24h时,PKCβⅡ和NF-κB p65的表达显著增加;孕酮处理情况下,PKCβⅡ和NF-κB p65的表达减少。实验结果提示,孕酮可能通过影响PKCβⅡ和NF-κB p65及IP3的表达实现其神经保护作用。