【目的】 1.探讨CITP是一种Th1/Th2细胞失衡相关(Th1细胞占优势)的自身免疫病。研究CITP患者外周血中Th细胞相关细胞因子IFN-γ和IL-10的水平，探讨CITP的Th细胞的偏移方向。 2.探讨CITP患者Th1/Th2细胞分化状态的指标。研究CITP患者外周血T淋巴细胞中T细胞转录调节因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达情况，比较T-bet/GATA-3比值与IFN-γ/IL-10比值的意义，及研究它们与Th1/Th2细胞分化失衡的相关性。 3.探讨配体活化的PPAR-γ对Jurkat T细胞T-bet/GATA-3表达的影响，及其与调节Th1/Th2细胞失衡之间具体的作用机制。 【方法】 1.外周血T淋巴细胞的分离取CITP患者及正常对照体检者外周静脉血，枸椽酸钠抗凝。淋巴细胞分离液常规分离外周血中单个核细胞，置玻璃培养皿中37℃孵育30min去除单核细胞，加入0.85％NH4Cl溶液溶解红细胞，经T细胞分离富聚柱获得纯化的T细胞。加入10％新生牛血清Hanks液重悬T细胞，调整T细胞浓度至2×106/ml。FITC标记的抗CD3单克隆抗体检测其纯度，台盼蓝拒染法检测其活性。 2.Th1及Th2细胞相关细胞因子含量的检测酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定血清中IFN-γ、IL-10的水平，按试剂盒说明书操作，用酶联免疫检测仪以450nm比色，测吸光度(OD)值，以标准曲线法计算样本浓度，以pg/ml表示。 3.T细胞转录因子T-bet/GATA-3 mRNA 表达水平的检测T淋巴细胞悬液抽提总RNA，RT-PCR一步法特异性提取T-bet、GATA-3mRNA，以β-actin为内参，琼脂糖凝胶电泳RT-PCR的扩增产物，采用凝胶成像系统扫描T-bet/GATA-3 mRNA的条带，得条带灰度值，以T-bet/β-actin、GATA-3/β-actin的灰度比值表示其mRNA表达的相对水平。 4.PPAR-γ调节Th1/Th2分化与T-bet/GATA-3途径的关系Jurkat T细胞培养于RPMI 1640培养。PHA(5μg/ml)活化Jurkat T细胞24h后，调整细胞浓度为5×106/ml，培养于24孔细胞培养板。将PPAR-γ激动剂吡格列酮(不同浓度)分别与Jurkat T细胞细胞混合培养，为探讨实验结果是否为PPAR-γ依赖性，每个浓度的吡格列酮组均多设一个加有PPAR-γ,特异性拮抗剂GW9662(终浓度为10 μM)的实验组，先于吡格列酮一个小时加入。12h，24h，48h后按上述方法分别检测Th1/Th2细胞因子表达谱及T-bet和GATA-3 mRNA表达的变化。探讨PPAR-γ/激动剂和T-bet/GATA-3途径对Th1/Th2分化的调节作用。 [结果] 1.分离纯化所得T淋巴细胞的纯度和活性均大于95％。 2.与正常对照组相比，CITP患者外周血Th1/Th2细胞因子比例明显升高。IFN-γ含量高于正常对照组、而IL-10水平却低于正常组。 3.与正常对照组相比，CITP患者外周血中转录因子T-bet mRNA的表达增加，而GATA-3的表达反而降低。 4.PPAR-γ激动剂吡格列酮对Jurkat T细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-10的表达均起抑制作用，抑制T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达，并具有浓度和时间依赖性。而GW9662(PPAR-γ特异拮抗剂)可缓解吡格列酮抑制IFN-γ分泌及T-bet mRNA表达，但对于IL-10、GATA-3mRNA的受抑程度则无明显影响。 [结论] 1.本研究所采用的T细胞分离纯化方法可用于科学研究。 2.CITP是一种Th1/Th2细胞失衡相关(Th1细胞占优势)的自身免疫病；作为反映CITP患者Th1/Th2细胞分化状态的指标，T-bet/GATA-3比值较IFN-γ/IL-10比值更有灵敏度和准确性。 3.CITP患者Th1优势，即呈现细胞免疫亢进状态，自身反应性T细胞增多，辅助B细胞产生抗体，或自身反应性T细胞通过细胞毒作用直接破坏血小板；且Th1型细胞因子IFN-γ等生成增加，加速了巨噬细胞的活化，单核巨噬吞噬功能增强，加剧了对血小板清除作用，从而使得CITP病情的发生与发展。 4.PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制Jurkat T细胞生长繁殖及细胞因子的表达。其抑制Th0向Th1细胞分化是PPAR-γ依赖性通过转录因子T-bet进行调节。而相关对Th2细胞的抑制作用，则非PPAR-γ,依赖性的转录因子GATA-3途径相关进行负性调节。PPAR-γ激动剂吡格列酮可用作免疫功能负性调节剂，在一些免疫功能亢进的疾病中具有广阔的应用前景。