本论文共包括四个部分:第一部分为前言;第二部分为论文的第一章,即全内反射荧光显微术检测溶液中的单个荧光标记抗体分子;第三部分为论文的第二章,即全内反射荧光显微术检测固定在硅烷化的导电玻璃上的单个抗原分子;第四部分为论文的第三章,即应用ITO导电玻璃的电转印技术的初步探讨。在前言中对Western blot技术、单分子检测技术及ITO导电玻璃在光学及生物检测方面的应用进行了综述。首先介绍了western blot技术发展、应用、优势及目前存在的问题;然后介绍了单分子检测近几年的发展及主要应用领域;最后介绍了ITO导电玻璃在光电检测方面的优越性及其在生物检测、生物传感器方面的应用。论文的第一章对全内反射荧光显微镜检测溶液中单个Alexa 488标记的羊抗鼠IgG(H+L)分子的方法进行了研究。使用ITO导电玻璃作为载体,讨论了在单分子成像中,降低杂质荧光的方法和激光功率、曝光时间等条件的选择。选择激光功率为10 mW,曝光时间为100 ms,并且使用将缓冲溶液过滤、对过滤后缓冲溶液和ITO导电玻璃进行光漂白等方法,有效地降低了杂质荧光。使用全内反射隐失场激发,减小激发体积,采用高灵敏度EMCCD对溶液中的单个羊抗鼠IgG分子成像。在5×10-12 mol/L～1×10-10 mol/L的浓度范围内,检测到的单分子的数目与溶液浓度有良好的线性关系。论文的第二章使用了全内反射荧光显微镜检测了固定在硅烷化的ITO导电玻璃上的单个小鼠的IgG分子。使用GOPS对ITO导电玻璃进行硅烷化,使ITO导电玻璃表面生成环氧集团,可以与抗原牢固结合。讨论了硅烷化的时间对ITO的导电性以及对小鼠IgG的吸附量的影响,并且通过对抗原固定时间、非特异性位点的封闭、多余反应物的漂洗时间、抗原(小鼠IgG)抗体(Alexa488标记的羊抗鼠IgG(H+L))孵育时间和抗原抗体孵育浓度等条件的讨论,我们达到了使用全内反射荧光显微术在硅烷化的导电玻璃上检测单个抗原分子(小鼠IgG)的目的,在5×10-14 mol/～5×10-13 mol/L的浓度范围内,检测到的单分子的数目与溶液浓度有良好的线性关系,并通过本实验说明使用硅烷化的ITO导电玻璃在其他生化实验中作为固相吸附载体以降低检测限的可行性。论文的第三章我们对western blot中的电转印技术进行了改进。我们使用了硅烷化的ITO导电玻璃作为电转印装置中的固相支持物来结合从凝胶中转印出的蛋白质(Alexa488标记的羊抗鼠IgG(H+L)),由于ITO的抗氧化性和良好的导电性,同时还将该导电玻璃作为电转印装置中的阳极来提供一均匀的电场。通过确定合适的转印电压,并且将电转印后的Alexa 488标记的羊抗鼠IgG在落射荧光显微镜下进行检测,得出不同转印时间的转印效率,说明使用硅烷化的ITO作为转印系统中代替常规转印膜的固相支持物,并且同时将其作为整个转印系统的阳极是可行的。与常规转印膜相比,ITO导电玻璃的使用可以大大降低荧光检测中的背景,并且可以通过使用超薄凝胶等方法来提高转印效率,降低了传统的western blot检测限。