【摘 要】
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猫传染性腹膜炎(Feline Infectious Peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒(Feline Infectious Peritonitis Virus,FIPV)引起的一种猫科动物致命性疾病。目前针对该病尚无有效疫苗。本研究通过冠状病毒反向遗传学操作系统,构建了三株突变毒株,分别命名为:QS-79dnsp15、79dnsp1和79dnsp1/15,并评价其致病性和免疫保
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猫传染性腹膜炎(Feline Infectious Peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒(Feline Infectious Peritonitis Virus,FIPV)引起的一种猫科动物致命性疾病。目前针对该病尚无有效疫苗。本研究通过冠状病毒反向遗传学操作系统,构建了三株突变毒株,分别命名为:QS-79dnsp15、79dnsp1和79dnsp1/15,并评价其致病性和免疫保护力,为FIPV疫苗或药物研究提供参考。1.FIPV突变病毒的构建前期研究表明nsp1和nsp15是FIPV的毒力蛋白。本课题组现有两种FIPV感染性克隆平台:QS-79 BAC和79-1146_CA BAC,通过CRISPR/Cas9系统和同源重组技术对FIPV nsp1和nsp15进行突变,成功构建3种FIPV突变体质粒,将质粒转染CRFK细胞可成功拯救出对应的突变毒株(QS-79dnsp15、79dnsp1和79dnsp1/15),并通过间接免疫荧光、蛋白质印迹法和测序进行了验证。生长动力学实验表明三种突变毒株的增殖曲线和亲本株相似,增殖能力良好。2.突变病毒致病性评价将成功构建的三种FIPV突变病毒通过口服感染成年猫,验证其致病性。成年猫口服感染QS-79dnsp15后,出现明显临床症状,死亡率为100%,结果表明QS-79nsp15突变后毒力未减弱。成年猫口服感染79dnsp1或79dnsp1/15后,无明显临床症状,也无死亡,结果表明79dnsp1和79dnsp1/15无致病性。3.突变病毒免疫保护力评价将79、79dnsp1和79dnsp1/15三种毒株分别口服免疫成年猫3次,随后通过感染强毒株来评价其免疫保护力。结果显示三组成年猫免疫3次后,都能产生较高中和抗体,随后用强致病性毒株(QS-79)攻毒,死亡率均为100%。但与未免疫直接攻QS-79毒株的对照组相比,79组和79dnsp1/15组发病晚,症状减轻,生存周期长,而79dnsp1未有此临床表现。以上结果表明高中和抗体不能保护成年猫免受强致病性FIPV感染,但可能会延缓其发病时间,减轻其临床症状,延长其生存周期,给患有传染性腹膜炎的病猫提供宝贵治疗时间。
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