骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化的实验研究

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前言血管化和骨再生是骨愈合过程中两个最基本环节,骨组织工程学的迅速发展,为骨再生和脊柱融合提供了合乎生物学原则的思路。当前该领域的研究主要集中于种子细胞的获取和诱导条件的探索,骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymalstem cells,MSCs)因其具有低免疫原性、多向分化及高增殖潜能而倍受关注。我们实验将探讨用血管内皮细胞生长因子(VEGF165)诱导骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞,为组织工程提供新的种子细胞、并探讨试验条件。目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)向血管内皮细胞的诱导分化,为复杂器官组织工程血管化及细胞移植修复损伤组织提供理想的细胞来源。探讨不同浓度的血管内皮细胞生长因子(VEGF165)对骨髓间充质干细胞增殖及向血管内皮细胞分化的影响。材料和方法一、实验材料(一)标本来源:骨髓间充质干细胞取自Wistar大鼠(体重100g左右,三周龄,雌雄不限,中国医科大学实验动物中心提供)。(二)主要试剂:血管内皮生长因子(VEGF165)、兔抗鼠VEGFR1/F1t1抗体、浓缩型免疫组化试剂盒二、实验方法采用密度梯度离心法与贴壁分离法相结合分离、纯化大鼠BMSCs,用含10%胎牛血清的L-DMEM培养至第三代作为种子细胞,对照组A组不加生长因子,实验组B、C、D、E组分别加入5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml VEGF165,培养24小时后各组间行细胞增殖比较,14天后终止培养,观察各组细胞形态学改变,并对各组行血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1/F1t1)免疫细胞化学染色。结果对于体外培养的骨髓间充质干细胞,含不同浓度VEGF165的各组培养液对骨髓间充质干细胞增殖作用大小不同,差异有统计学意义。并且含VEGF165的各组培养液与对照组比较,其能够诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化,其诱导后的阳性细胞比例分别为2.1598±0.2555%、30.3591±5.1687%、44.7643±2.1011%、56.0111±2.9603%、86.2438±0.9663%,差异有统计学意义,且实验组各组之间诱导效果不同。结论骨髓间充质干细胞具有向血管内皮细胞诱导分化的能力,可以作为组织工程的种子细胞。VEGF165可以促进骨髓间充值干细胞增殖和向血管内皮细胞诱导分化,并且其促增殖作用和诱导分化作用存在着剂量依赖关系。
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