论文部分内容阅读
背景与目的自从1922年Axhausen报道了酒精中毒的病人容易患骨坏死疾病以来，人们就一直在探究股骨头坏死（Osteonecrosis of the femoral head，ONFH）与酒精之间的关系。1968年Jones发现酒精中毒引起的股骨头软骨下骨坏死具备骨坏死的所有特征。近年来，伴随着人民生活水平的提高，饮酒的人愈来愈多，酒精的消耗量也不断增加，酒精性股骨头坏死患者在逐年增加。现在已有明确证据显示酒精为导致股骨头坏死的病因之一。关于股骨头坏死的发病机理学说有多种，如脂肪栓塞学说、高凝低纤溶学说、骨内高压及静脉瘀滞学说、微血管损伤学说以及骨质疏松学说等。以往人们研究酒精性ONFH的病理变化，发现早期酒精性ONFH股骨头内脂肪髓（脂肪堆积），脂质代谢紊乱，脂肪细胞增殖肥大，压迫毛细血管及血管窦，造成骨内高压及静脉回流障碍。进一步研究发现酒精调控股骨头细胞内成脂基因表达升高，成骨基因表达下降，并且酒精诱导骨髓多功能干细胞系成脂分化，抑制其成骨分化，加重股骨头内脂肪堆积而骨修复不足的病理过程从而导致股骨头的缺血坏死。晚期酒精性ONFH（ARCOⅢ-Ⅳ期）病理表现典型：软骨下骨折，骨量减少，坏死区面积特别大，有大块坏死骨，周围修复硬化带明显，股骨头塌陷、变形。但是目前尚不清楚坏死区骨组织细胞中相关基因的表达情况，国内外文献亦未见报道。故本研究收集人类酒精性ONFH患者股骨头标本，采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测股骨头坏死区内骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、成骨转录因子-2（Runx-2）、过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPAR-γ）、护骨素(osteoprotegerin，OPG)、破骨细胞分化因子(receptor activatorofNF．KB ligand，RANKL)mRNA的表达情况，进一步探讨晚期酒精性ONFH坏死区骨组织细胞中相关基因表达的变化，对晚期酒精性ONFH治疗措施的选择有一定的参考价值。材料与方法2013年1月~2013年6月，收集10例ARCOⅢ-Ⅳ期（ARCOⅢ-B期3例，ARCOⅢ-C期3例，ARCOⅣ期4例）酒精性股骨头坏死患者股骨头骨组织和10例GardenⅢ-Ⅳ期（GardenⅢ期5例，GardenⅣ期5例）新鲜股骨颈骨折患者股骨头骨组织，分别作为实验组和对照组。实验组为晚期酒精性股骨头坏死患者，男8例，女2例，年龄33～60岁，平均45岁，无激素应用史、感染、创伤等其他病史。对照组男6例，女4例，年龄44～70岁，平均52岁，术前病程3-7天，平均5天，无饮酒史、激素应用史及其他病史。实验中观察股骨头大体标本形态，坏死区面积大小、颜色、质地，再采用RT-qPCR技术分别测定两组股骨头骨组织中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKLmRNA的相对表达量。结果RT-qPCR检测各目的基因的Ct值，最后采用2-Ct法分析实验组相对于对照组目的基因表达变化的倍数，本实验结果显示实验组坏死区骨组织中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKL mRNA的表达量较对照组均明显降低：2-△△Ct分别为0.51±0.04、0.46±0.09、0.59±0.07、0.31±0.04和0.51±0.06，差异有统计学意义，P＜0.01。结论1.晚期酒精性ONFH的坏死面积特别大，残存的骨细胞很少；2.晚期酒精性ONFH坏死区骨组织内成骨、成脂基因表达均降低。