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井冈霉素是我国最大的一类农用抗生素,对纹枯病有好的防治作用,目前在我国大量使用,其市场价格低廉。井冈胺是井冈霉素的组成部分,是重要的医药中间体,其销售价格是井冈霉素的几十倍。因此以井冈霉素为原料生产井冈胺具有巨大的经济效益和社会效益。 本实验拟从井冈霉素出发,利用微生物培养和酶催化的基本原理和技术,研究微生物菌株的生理生化特性,实现井冈霉素的有效微生物酶降解。通过菌种的诱变和培养工艺的优化,提高微生物菌株的分解酶活力。 首先对本实验室已筛选到的菌株经过紫外诱变和亚硝基胍诱变后,得到了一株在生理特性上有较大区别的菌株,诱变后的菌株能使井冈胺的产量提高到一倍以上。 对新筛选到的菌株进行了培养工艺条件的优化,得到发酵培养基的最适初始pH值为8.0,最佳发酵温度为30℃,最适底物浓度为1%。在培养基优化过程中,研究了碳源、氮源、磷源和无机离子对发酵的影响。碳源以井冈霉素为好,最佳浓度为1%,氮源选择了1%的(NH4)2SO4;选择了有促进作用的CaCl2、KCl、MgSO4和ZnSO4,对其浓度进行了单因素试验和正交试验,结果表明,在最佳培养基条浙江工业大学硕士学位论文件下发酵液中井冈胺的含量达到了2.43mg/ml,井冈胺得率有71 .5%,比在原培养基基础上所得的结果l.6omg/ml,产量提高了51.9%。 最后对菌种产生的酶进行了分离纯化和酶的性质研究。经过一系列的纯化酶的纯化倍数达到了巧.37,产率为9.6%。对酶的性质经过初步研究,结果表明:酶的最适pH值为8.0,pH值稳定范围为7一8,最适反应温度为40℃,温度稳定范围在40℃以下,CaZ+和K+对该酶有强烈的激活作用,而FeZ十和SDS对该酶有明显的抑制作用,以井冈霉素为底物该酶的Km一22.smmol几,vm一59.17ogml一‘h一’。