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1、产肠毒素性E．coliLT全基因的克隆与序列分析根据GenBank中收录的LT基因序列，设计并合成一对引物，以猪产肠毒素大肠杆菌临床分离株ECOH1的DNA为模板，通过PCR技术扩增出约1.3kb的片段。将此PCR产物克隆到pMD18-T载体上，构建了重组质粒pMDTLT，测序结果表明所克隆的LT基因序列全长为1334bp，与GenBank收录的序列的核苷酸同源性在97.6％-98.8％之间。2、E．coli野生株F18菌毛FedF基因的克隆表达及免疫原性研究根据Z26520中fedF序列设计1对引物，从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因，经纯化、连接、转化，将其克隆到pMD18-T中，所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性在97.8％～99.2％。另设计1对引物，利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中，转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS获得表达重组菌。SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明重组菌在诱导后可以表达特异性的FedF蛋白，该重组蛋白分子量约为30kDa。该重组蛋白的表达量占菌体总蛋白量的11.17％。将纯化的重组FedF蛋白免疫小鼠，攻毒试验表明免疫小鼠可完全抵抗致死性的E．coli的感染。3、大肠杆菌LTB-FedF融合蛋白的表达及免疫原性研究经PCR、酶切、连接和转化将LTB成熟肽基因按预定的阅读框架插入到表达质粒pET28a(+)中，获得重组质粒pETLTB，用同样的方法将fedF成熟肽基因片段插入到重组质粒pPLTB中LTB基因的3’末端，获得LTB-fedF融合基因的质粒pETLTBFedF。SDS-PAGE与Western-blotting分析表明转化该质粒的重组大肠杆菌在IPTG诱导下可以高效表达融合蛋白LTB-FedF，该重组蛋白分子量约40kDa。该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的23.17％。融合蛋白经纯化后免疫小鼠，攻毒保护试验表明免疫小鼠只得到部分保护。结果说明在此融合蛋白中LTB起到了免疫抑制作用，其原因有待进一步的研究。