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喉癌（laryngeal cancer，LC）是头颈部常见的恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的5.7%~7.6%，其发病率居头颈部恶性肿瘤的第二位[1]，40%患者发现并确诊时已进展为III期或IV期[2]。对于喉癌的治疗，晚期患者不得不以牺牲喉的功能为代价来延长生命，因此早发现早治疗可以有效地提高喉癌患者的生存质量及生存期。目前喉癌的研究已经进入基因水平，现有研究已发现喉癌的发生发展与多种基因密切相关，如EGFR、COX-2、VEGF、STAT3、Ccbe1、Survivin、c-myc、p53、p16、Cyclin D1和Jab1等[3]。HMGB1基因在多种肿瘤中可检测到高表达[4-7]，它参与肿瘤发生发展多个过程，其过表达可导致肿瘤细胞的过度增殖及远处转移。目的：通过分析HMGB1基因及其蛋白在喉癌病变组织和喉癌细胞系中的表达模式、siRNA靶向干扰喉癌细胞系中的HMGB1基因、检测基因沉默后喉癌细胞生物学行为的改变，进而探讨HMGB1对于喉鳞状细胞癌增殖、侵袭及远处转移作用的调控机制，尝试探讨HMGB1在喉鳞状细胞癌耐药作用中的调控机制，以期发现预防喉癌发生发展的新靶点。方法：1、采用免疫组织化学方法研究HMGB1蛋白在转移喉鳞状细胞癌、非转移喉鳞状细胞癌中的表达情况，分析HMGB1蛋白表达与喉鳞状细胞临床转移的相关性；2、采用细胞免疫荧光分析HMGB1蛋白在喉癌Hep-2细胞及喉癌Hep-2/v耐药细胞中的表达模式；3、合成HMGB1基因序列的siRNA表达载体，利用脂质体法转染入人喉癌Hep-2细胞和喉癌Hep-2/v耐药细胞系中；4、瞬时转染Hep-2细胞24h后，采用RT-PCR及Western Blot方法分析HMGB1基因及其蛋白表达变化；5、Western Blot方法分析转染后喉癌Hep-2细胞中RAGE蛋白、NF-κB蛋白表达变化，喉癌Hep-2/v耐药细胞系中MDR1蛋白表达变化；明胶酶谱法检测转染前后喉癌Hep-2细胞中MMP-2及MMP-9蛋白活性变化；6、划痕实验检测干扰前后喉癌Hep-2细胞体外迁移能力的改变，平板克隆形成实验检测干扰前后喉癌Hep-2细胞克隆形成能力改变，Transwell实验检测干扰前后喉癌Hep-2细胞迁移及侵袭能力变化；7、CCK8及细胞周期实验检测干扰前后喉癌Hep-2/v耐药细胞系增殖能力变化，Western Blot及细胞免疫荧光实验检测干扰前后喉癌Hep-2/v耐药细胞系HMGB1和MDR1蛋白表达变化。结果：1、全部喉癌标本中HMGB1蛋白表达阳性标本占92.86%，发生淋巴结转移的喉癌标本中阳性表达率为94.44%，未发生淋巴结转移的喉癌标本中阳性表达率为79.17%，两组比较χ2=14.45，P＜0.05；2、细胞免疫荧光结果显示HMGB1在Hep-2及Hep-2/v耐药细胞系的细胞核及细胞浆中均有表达，前者以细胞核表达为主，后者细胞浆表达强于细胞核；3、siRNA-hmgb1可抑制喉癌Hep-2细胞中HMGB1mRNA和HMGB1蛋白的表达，抑制率分别达到61.39%和47.69%；4、瞬时转染Hep-2细胞24h后，阳性对照组中RAGE及NF-κB蛋白的表达量较阴性对照组分别下降52.44%（P＜0.01）和30.59%（P＜0.05）；5、瞬时转染Hep-2细胞24h、48h、72h后，阳性对照组表达的MMP-9蛋白活性较阴性对照组下降显著，分别为94.50%、84.71%、66.79%（P＜0.01）；MMP-2蛋白活性也下降显著，分别为57.96%（P＜0.01）、39.25%（P＜0.01）及26.34%（P＜0.05）；6、瞬时转染Hep-2细胞的第2日，6h、12h和24h时，阳性对照组的相对迁移率分别为44.144.48、53.50.58和93.60.39，12h-24h迁移能力下降最明显，与其余两组相比均具有非常显著性差异（P＜0.01）；7、平板克隆形成实验结果提示阳性对照组细胞克隆数分别为503.0±8.19、317.7±17.82和174.3±4.63，与阴性对照组相比，各接种组别均具有显著性差异；（P＜0.05）；8、瞬时转染Hep-2细胞24h后，阳性对照组穿膜细胞数为（36.675.24）个/HP，明显低于阴性对照组（128.7023.75）个/HP，两组比较t=3.783，具有显著性差异（P＜0.05）；9、瞬时转染Hep-2/v细胞24h后，阳性对照组较阴性对照组增殖能力下降20.18%（P＜0.01）；瞬时转染Hep-2/v细胞48h后，阳性对照组较阴性对照组增殖能力下降21.92%（P＜0.05）；10、瞬时转染Hep-2细胞24h后，阳性对照组中G1期的细胞比例明显增加，与其他组相比均具有显著性差异（P＜0.05），siRNA-hmgb1可将喉癌Hep-2/v细胞有效阻滞在G0/G1期；11、siRNA-hmgb1可以抑制喉癌Hep-2/v细胞中HMGB1和MDR1蛋白表达，抑制率分别达到41.38%（P＜0.01）和26.77%（P＜0.05）。结论：1、喉癌标本中可见HMGB1蛋白表达，且发生淋巴结转移的喉癌标本HMGB1蛋白表达量显著高于不伴淋巴结转移的喉癌标本，HMGB1蛋白与喉癌的发生发展及远处转移具有一定相关性；2、本研究中，siRNA-hmgb1可抑制喉癌细胞的体外迁移能力及侵袭能力；3、本研究中，siRNA-hmgb1可抑制喉癌细胞的增殖能力；4、本研究中，siRNA-hmgb1可降低喉癌耐药细胞的耐药性；5、本研究中，HMGB1基因可能成为治疗喉鳞状细胞癌的分子靶点。