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血吸虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病,血吸虫生活史复杂,与终宿主有关的虫体有尾蚴、童虫、成虫、虫卵阶段,从尾蚴侵入到雌虫成熟产卵在体内经历了复杂的移行,发育过程。不同虫体在形态学和生物学上的变化也伴随着不同的蛋白差异表达,导致血吸虫独特的代谢和发育过程。 本实验收集日本血吸虫尾蚴、8天和19天童虫、42天雄虫、雌虫和虫卵,分别抽提可溶性及疏水性蛋白,建立24cm、pH3—11的高重复性银染及考染双向电泳图谱,利用Imagemaster 2D软件对电泳图谱分析表明,在尾蚴、8天童虫、19天童虫、雄虫、雌虫、虫卵中分别检测到可溶性蛋白斑点928±61、1465±41、1230±30、904±34、1080±26、1476±52个;疏水性蛋白斑点845±53、986±22、1145±35、1066±39、1123±45、1337±44个。图谱比对显示童虫、雌雄成虫蛋白之间图谱相似性较高,其中8天与19天童虫蛋白图谱相似性最高,尾坳、虫卵与童虫和成虫蛋白相似性较低。 在图谱分析的基础上用电喷雾线性离子阱质谱(LTQ)或基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)对95个表达稳定的差异、特异以及共有可溶性蛋白进行鉴定,成功获得了84个蛋白斑点的肽指纹图谱及肽序列检测数据,这些蛋白包括8天童虫蛋白29个、19天童虫蛋白16个、雄虫蛋白18个、雌虫蛋白12个、虫卵蛋白9个,分属75种蛋白,其中60种有功能相关信息,数据库检索结果表明这些蛋白主要与细胞运动,蛋白折迭、修饰、合成,核酸合成,信号转导、肌肉发育、电子传递等功能相关。最后,利用RT-PCR方法对3个差异表达蛋白斑点和1个共有表达蛋白斑点进行验证,除1雄虫差异表达蛋白在童虫也出现阳性反应外,其它3个RT-PCR结果与双向电泳结果一致。 本论文工作对从分子水平上阐明血吸虫移行、发育、免疫逃避、生殖、卵形成以及致病的机制,为开发抗血吸虫感染和抗生殖疫苗提供新的候选分子,及为筛选新的免疫诊断抗原提供基础。