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去唾液酸糖蛋白受体（asialoglycoprotein receptor, ASGPR）又称半乳糖受体,主要表达于哺乳动物肝窦状隙的肝实质细胞表面。去唾液酸糖蛋白受体能专一性识别、结合并内吞循环血液中末端含有半乳糖和乙酰氨基半乳糖的糖蛋白,常用于介导药物或药物载体肝靶向递送。经半乳糖修饰药物或药物载体在体内能被肝实质细胞表面的去唾液酸糖蛋白受体识别而结合,从而使半乳糖化的药物或药物载体聚集于肝脏,显著提高药物对肝脏的靶向效果,是研制治疗肝脏疾病新药的重要途径之一。用半乳糖配体修饰脂质体是目前研究较多的一个方向也是目前研究的热点,即用脂质体作为药物的载体再在其表面嫁接半乳糖配体,使其进入机体后能够迅速聚集于肝脏,从而提高药物的靶向性,降低对正常细胞的杀伤力。目前,将半乳糖配体连接到脂质体上最常见的方法为共价偶联法,是将疏水基团长链脂肪链烃（如硬脂乙烯酯等）或磷脂与配体偶联,利用其脂肪长链的作用使半乳糖配体镶嵌于脂质体表面双层膜中,从而形成半乳糖配体修饰脂质体。然而,文献所报道的配体偶联合成修饰物一般都是采用化学法,存在反应条件苛刻、副产物较多、操作步骤繁琐、有机溶剂污染环境等缺点。相比化学法,酶催化法具有反应条件温和、效率高、选择性强、副产物少等特点。由此,本文采用非水相酶催化半乳糖上的羟基与硬脂酸乙烯酯上的酯基发生酯交换反应,偶联键合生成一种可用于镶嵌脂质体表面的肝靶向配体修饰物。本论文首先用酶促酯化半乳糖与硬脂酸乙烯酯合成一种可用于镶嵌脂质体表面的半乳糖配体修饰物。通过薄层色谱（TLC）、质谱（ESI-MS）和核磁共振（1HNMR）对产物结构进行鉴定,结果发现,通过酶促酯化反应可将硬脂酸乙烯酯接载到半乳糖6位的羟基上得到含脂肪长链的半乳糖修饰物。对酶种类、反应介质、酶的加入量、底物摩尔比、反应温度、反应时间等影响因素进行考察,结果表明,丙酮作为反应介质,Novozym 435固定化脂肪酶作为催化剂,当酶加入量为30 mg-mL-1,半乳糖和硬脂酸乙烯酯的摩尔比为1：5,60℃下反应12 h,硬脂酸乙烯酯的转化率可达到70%以上。该合成方法具有高效、反应产物定位专一、反应条件温和等特点。在合成得到半乳糖肝靶向配体之后,选择多烯紫杉醇为模型药物,以半乳糖修饰物作为靶向头基,制备了以去唾液酸糖蛋白受体介导的主动靶向脂质体。在多烯紫杉醇半乳糖配体脂质体（Gal-DOC-L）的制备过程中,首先考察了脂质体包封率测定方法,结果表明,用透析法测定药物包封率较为准确可靠；对脂质体的制备方法进行了比较,并通过单因素试验和正交设计试验对配体脂质体的处方进行了优化。最终确定,采用乙醇注入法制备多烯紫杉醇半乳糖配体脂质体,制备工艺为：精密称定磷脂、胆固醇、VE及药物（质量比6：2：1：0.3）,加入10%的半乳糖配体,溶于无水乙醇中,水浴加热溶解,所得类脂溶液缓慢匀速的注入到恒温55℃的磷酸盐缓冲液（PBS） （pH 7.4,33.23 mmol-L-1）中,注入过程中通入N2除去乙醇。注入完毕后,45℃孵育20 min,超声处理6 min,依次经0.45、0.22μm微孔滤膜过滤,即得Gal-DOC-L。同法制备得到多烯紫杉醇普通脂质体（DOC-L）。在确定脂质体制备工艺的基础上,对Gal-DOC-L、DOC-L的理化性质进行了系统考察。所制备的脂质体均为半透明略带乳光的混悬液,色泽均匀,流动性好。透射电镜观察结果显示,DOC-L与Gal-DOC-L粒径分布均匀,外形圆整,分散性较好；激光散射粒径测定结果表明,DOC-L与Gal-DOC-L的粒径分布范围较窄,平均粒径分别为126.8 nm、155.2 nm,呈单峰分布；Zeta电位分析仪测定结果显示,DOC-L表面Zeta电位为（-20.8±0.3） mV, Gal-DOC-L表面Zeta电位为（—33.1±0.6）mV；体外释放度实验表明,DOC-L与Gal-DOC-L的药物释放均具有明显的缓释效果,体外释放曲线符合Weibull分布函数；制备得到的脂质体药物包封率均在80%以上,且氧化指数低,氧化程度小；在0-4℃条件下放置3个月脂质体的渗漏率小于6%,粒径变化不大,仍能保持稳定；将其按临床用法稀释,粒径和包封率没有明显变化。对Gal-DOC-L、DOC-L在家兔体内的药代动力学行为进行了考察,研究结果显示,与多烯紫杉醇普通注射液（DOC）相比,脂质体的AUC显著增加（P<0.05）,清除率（CL）减小（P<0.05）。因此,Gal-DOC-L、DOC-L在体内可保持相对较高的血药浓度,延长药物在体内的作用时间,在一定程度上可以增强药物的治疗效果。最后,对DOC-L、Gal-DOC-L在小鼠体内的组织分布及肝靶向性进行了考察。DOC溶液、DOC-L和Gal-DOC-L三种制剂经小鼠尾静脉注射后,测定药物在小鼠体内的组织分布,用DAS 2.0药代动力学程序计算DOC、DOC-L和Gal-DOC-L在各组织中的AUCo12和Cmax,分别采用相对摄取率（re）、峰浓度比（Ce）和靶向效率（te）作为评价参数,对DOC-L、Gal-DOC-L的肝靶向性进行评价。结果显示,DOC-L和Gal-DOC-L的相对摄取率re分别为2.80和4.34；峰浓度比Ce分别为1.67和2.38；靶向效率te分别为28.44%和38.91%,表明药物经脂质体包封后对肝脏具有一定的靶向效应,而半乳糖配体的引入可进一步提高脂质体对肝脏的靶向性。综上所述,本论文采用了非水相酶催化技术对半乳糖进行结构修饰,合成一种可镶嵌于脂质体表面双层膜中的肝靶向配体镶嵌物（半乳糖修饰物）。然后以多烯紫杉醇为模型药物,用乙醇注入法制备以去唾液酸糖蛋白受体介导的Gal-DOC-L。药理实验显示,相比于DOC-L,Gal-DOC-L对肝脏具有更好的靶向效果,半乳糖化脂质体是一种较为理想的肝靶向载体。本项目的研究将为肝靶向给药系统提供了一种较好的靶向载体,具有一定的学术价值和应用前景。