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拉米夫定是目前国际公认的对乙肝病毒复制具有确切抑制作用的核苷类似物，临床应用日益广泛，但拉米夫定在治疗过程中出现的HBV病毒变异可导致病毒的耐药及病情复发甚至加重，因此，建立有效的病毒变异检测方法，发现影响病毒变异发生的相关因素，必将对该病的临床诊断治疗起到积极作用。
[目的]：采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者在使用拉米夫定过程中，乙型肝炎病毒YMDD变异的发生情况，并研究影响变异发生的相关因素，为临床预测和判断HBVYMDD变异提供一定的依据。
[方法]：设计包含两个变异位点(I/V)和无变异参照位点的3条下游引物，与同一条上游引物和探针建立3管PCR反应体系，对采用拉米夫定治疗的249例慢性乙型肝炎和64例乙肝肝硬化患者的300份血清通过实时荧光PCR反应后的CT值判断是否发生已知(I/V)位点变异。并应用SPSS统计软件对YMDD变异的发生率及影响因素进行统计学分析。
[结果]：
1.所有病例在整个随访过程中共有74例发生YMDD变异，其中YIDD35例，YVDD23例，YIDD/YVDD共生变异16例.
2.随治疗时间的延长，YMDD变异的累积发生率逐渐提高，慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者的YMDD变异的累积发生率于12、24、36、48个月分别为：8.84％和17.19％，20.91％和32.40％，26.92％和39.56％，26.92％和58.79％。
3.Long-rank分析发现，年龄大于20岁，治疗前ALT、AST水平偏低，基线HBVDNA水平较高，高水平HBeAg定量，HBeAg阴性，治疗过程中未实现HBeAg血清转换，治疗12周时HBVDNA仍在检测水平以上以及诊断肝硬化，未联合干扰素(单用拉米夫定)者均与YMDD变异的较早出现有关(P＜0.05)。
4.Cox回归分析显示末联合干扰素、基线ALT水平较低、HBVDNA水平较高、未出现HBeAg血清转换者与YMDD变异独立相关。
[结论]：
1.实时荧光PCR法检测HBV拉米夫定耐药突变快速、简单、灵敏，成本-效益比高。
2.慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者，在拉米夫定治疗过程中，都随着用药时间的延长，YMDD变异的累积发生率逐渐提高。
3.基线ALT水平较低者、基线HBVDNA水平较高者、HBeAg阴性、HBeAg定量较高者YMDD变异的累积发生率较高。
4.治疗12周时HBVDNA水平降至检测水平以下者，治疗过程中出现HBeAg血清转换者，YMDD变异的累积发生率较低。
5.拉米夫定联合干扰素治疗者较单独拉米夫定治疗者YMDD变异的累积发生率较低。
6.诊断乙肝肝硬化者和年龄超过20岁的患者应用拉米夫定治疗发生YMDD变异的可能性较大。
7.基线ALT水平低、HBVDNA水平高、未联合干扰素治疗和治疗过程中未出现HBeAg血清转换可作为YMDD变异发生的预测因素。