凝胶多糖的发酵研究

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凝胶多糖(curdlan)是由微生物菌株Alcaligenes faecalis Var.myxogenes发酵生产的直链无分枝的β-(1,3)-葡聚糖,是一种胞外分泌性的微生物次生代谢物,具有加热形成凝胶的特殊性质,在食品、轻工、医药、保健等领域有广泛的应用开发前景。本论文对购买的Alcaligenes faedelis菌株进行了紫外诱变和菌种选育,获得了一株高产的稳定突变株U36,并应用响应面法优化了此菌株的发酵培养基成分,以及优化了此菌株的发酵工艺,对发酵后得到的产物进行了提取、分离和纯化;对分离得到的产品进行了一些结构的测试,证明本实验发酵所得的产物为凝胶多糖。通过对出发菌株进行紫外照射诱变处理,在指示选育平板上选育出了高产突变菌株U36,并通过对该菌的发酵培养基组分进行了实验,并进行了响应面实验,确定了最佳的发酵培养基组成为(g/L):葡萄糖49.3,酵母粉4.8,磷酸二氢钾2,硫酸镁0.5,碳酸钙2,发酵产量最大预测值为22.85。并对菌株U36的发酵工艺条件进行了优化,应用响应面设计优化Curdlan发酵的培养基条件为:种龄14.8小时,接种量9.8%,摇床转速为203rpm,发酵培养时间为92.3小时,在优化的培养基条件下,发酵生产Curdlan得到的发酵多糖产量为29.2g/L,葡萄糖的转化率达到了58%。对几种现今常用的凝胶多糖的提取方法酸碱法,碱醇法,乙醇沉淀法,钙盐-乙醇法进行了比较,认为酸碱法是比较合理的提取方法:在对凝胶多糖粗品的进一步分离纯化中,使用Sevage法脱蛋白5次左右,可以大大降低Curdlan粗多糖中的蛋白质含量,通过透析后可以除去多糖内多余的杂质离子,最后通过真空干燥可以得到较纯的凝胶多糖产品。通过对提纯后的Curdlan进行性质测定后,证明了发酵产物为Curdlan。红外光谱显示了提纯后的样品与Curdlan标准品一致的特征峰,并进行了染色及其他定量测试。
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