论文部分内容阅读
帕金森病(ParkinsonS disease，PD)是一种常见的中老年神经系统变性疾病，有较高的患病率和致残率，是危害中老年人健康的主要疾病之一。其中a-突触核蛋白(a-synuclein,a-Syn)的异常折叠是PD发生发展的重要原因。分子伴侣DJ-1(PARK7)和a-Syn核心区域(66VGGAVVTGV74)来源的小分子多肽(简称小肽Pn)可以促进a-Syn的正确折叠。
本课题组利用分子生物学和生物信息学技术，以a-Syn的核心区域为基础，设计了4种小肽(Pn：P1-P4)。以文献报道的小肽Pc(MGGAVVTGR)为对照，利用融合蛋白相互作用在细菌中可视化技术和双质粒共表达的方法在大肠杆菌中分别研究小肽Pn、DJ-1(WT，M26I，R98Q)及DJ-l(WT)-Pn影响a-Syn(A53T，S129A)的正确折叠。得出主要结论如下：
(1)小肽Pn可以不同程度的促进Q.Syn(A53T，S129A)的正确折叠，而且4种小肽均能更好地促进a-Syn(S129A)的正确折叠；和对照Pc相比，小肽P2使a一Syn(A53T)正确折叠提高了10％，小肽P4使a-Syn(S129A)正确折叠提高了83％。
(2)双质粒表达方法可行。野生型DJ-1(WT)使a-Syn(A53T)和a-Syn(S129A)正确折叠分别提高了48％和16％；而突变的DJ.1(M26I，R98Q)不能促a-Syn(A53T，S129A)的正确折叠。
(3)DJ-l(wr)-Pn可以促进a-Syn(A53T，S129A)的正确折叠，而且能更好地促进a-Syn(S129A)的正确折叠；与对照相比，DJ-I(WT)-P4使a-Syn(A53T)的正确折叠提高了11％；DJ-I(WT)-P1和DJ.I(WT)-P2能够显著促进a-Syn(S129A)的正确折叠，分别提高了58％和56％；不同的a-Syn(A53T)和a-Syn(S129A)对DJ-I(WT)-Pn的敏感程度是不一样的。
(4)DJ-1(WT)可以提高小肽Pn促进a-Syn(S129A)正确折叠的效果。在DJ-1的作用后，小肽P3使a-Syn(A53T)正确折叠的效果比单独作用时提高了76％；而小肽P1使a-Syn(S129A)正确折叠的效果比单独作用时提高了42％。
促进a一Syn正确折叠的多肽的应用，将有希望直接阻止a-Syn错误折叠的继续产生，阻断甚至逆转由蛋白异常折叠造成的神经损伤。对于了解这类疾病的致病原因，开发新的预防和治疗手段具有重要意义。