论文部分内容阅读
胃癌是世界范围内第二大致死性癌症,由于缺乏有效的早期诊断措施和特效的治疗方法,多数患者很难在早期发现,胃癌病人尤其是晚期患者的预后仍然很差。因此,深入研究胃癌发生发展的分子机制是寻找有效的诊断标志和改进治疗方案的根本。现研究表明,趋化因子及其受体在淋巴细胞归巢、免疫应答、感染、自身免疫性疾病、抑制免疫排斥及肿瘤细胞增殖、血管生成和侵袭转移等众多生理、病理过程中起着非常重要的作用。CXCL16是CXC类趋化因子,其唯一受体为CXCR6。该趋化因子轴在多种肿瘤中高表达,并对肿瘤的发展起促进或抑制作用。胃癌的发生与慢性炎症密切相关,幽门螺杆菌(H.pylori)可导致慢性胃炎,同时促进消化性溃疡和胃癌的发生,是世界公认的I类致癌物。H.pylori导致的胃炎主要引起Thl细胞类型的活化,该类细胞可分泌大量的IFN-γ, IFN-γ又可刺激多种细胞因子(包括趋化因子)的表达,起到抗细菌、抗肿瘤的保护作用。由于趋化因子参与到与炎症和肿瘤相关的生理病理过程中,本文着重研究了CXCL16-CXCR6轴对胃癌细胞系生物学行为的影响。同时,因H.pylori在慢性胃炎向胃癌的转化中发挥重要的促进作用,我们联系CXCL16-CXCR6轴与H.pylori、 IFN-γ之间的相关性,对CXCL16-CXCR6轴作用于胃癌的可能机制进行了更深入的分析,以期为胃癌的诊治提供理论支持和指导。目的检测人CXC型趋化因子配体16(CXCL16)及其受体CXCR6在胃癌细胞系及临床获取组织标本中的表达情况,并分析其表达与临床病理特征之间的相关性。通过体外细胞实验检测CXCL16-CXCR6轴对胃癌细胞系侵袭迁移、增殖和克隆形成能力的影响,并检测H.pylori及IFN-γ体外刺激下胃上皮细胞系和胃癌细胞系中CXCL16及CXCR6的表达变化。构建H.pylori所致胃炎动物模型,检测IFN-γ、 CXCL16的表达变化,进一步探讨H.pylori. IFN-γ与CXCL16之间的相关性以及CXCL16-CXCR6轴对胃癌影响的作用机制。方法1、利用PCR检测五种胃癌细胞系和一种胃永生化上皮细胞系中CXCL16及CXCR6的表达。2、选取临床病理标本,通过免疫组化检测CXCL16及CXCR6在组织中的表达,比较二者在癌组织与相应癌旁组织中的表达差异,并分析二者表达强弱与胃癌患者临床病理特征之间的相关性。3、构建靶向CXCR6的小干扰RNA(siCXCR6)阻断CXCR6的表达,选用MGC-803和BGC-823两种胃癌细胞系,采用Transwell细胞迁移侵袭实验、CCK-8细胞增殖检测法和克隆形成实验,观察干扰阻断CXCL16-CXCR6轴后胃癌细胞迁移侵袭能力、增殖活性和克隆形成能力的变化。4、用H.pylori(按细菌：细胞=100：1的比例感染细胞)及不同浓度的促炎性细胞因子IFN-γ处理胃上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系MGC-803,检测CXCL16及CXCR6在mRNA水平和蛋白水平的表达变化。5、用C57BL小鼠构建H.pylori所致胃炎动物模型,检测IFN-γ、CXCL16的表达变化。结果1、mRNA水平,人趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在胃癌细胞系及上皮细胞系中均有表达,且表达水平无明显差异。2、免疫组化显示CXCL16和CXCR6在胃癌腺体及相应癌旁正常组织中均有表达,主要表达于癌组织及非癌组织中的腺体胞浆和胞膜,在癌旁浸润的淋巴细胞(TILs)中亦有表达。分析显示,二者在癌组织中的表达高于相应癌旁组织,有统计学差异(CXCL16:p<0.01; CXCR6:p<0.01)。联系临床病理资料分析显示,二者表达与胃腺癌肿瘤大小、分化程度存在相关性,而与患者性别、年龄、淋巴结转移、UICC分期无关。3、在MGC-803和BGC-823两种细胞系中转干扰siCXCR6后进行的体外实验显示,干扰组胃癌细胞系的侵袭迁移能力、增殖能力及克隆形成能力均显著增强,提示CXCL16-CXCR6轴对胃癌的发生发展可能起到抑制作用。4、经H.pylori和不同浓度的IFN-γ刺激后,GES-1和MGC-803中CXCL16的mRNA水平及蛋白水平的表达均迅速出现显著上调,CXCL16表达增高的水平随IFN-γ浓度的增高而增高。CXCR6的表达未见明显变化。5、动物实验显示,H.pylori感染的组织中IFN-γ和CXCL16的表达明显上调,且二者在同一小鼠中表达上调的幅度相似。结论CXCL16及CXCR6表达于胃癌和正常胃组织腺体的细胞胞膜和胞浆,在肿瘤浸润的淋巴细胞中也有表达。CXCL16和CXCR6在瘤体较小、高中分化腺癌的胃癌患者中表达更高,CXCL16-CXCR6轴对胃癌的发生发展可能起到抑制作用。H.pylori及促炎性细胞因子IFN-γ都可刺激CXCL16的表达,体内实验发现IFN-r与CXCL16之间的表达可能存在一定的相关性。综合我们的实验结果,我们推断在胃炎与胃癌微环境中,存在IFN-γ与CXCL16互相促进表达的正反馈环路,该环路起到增强炎性反应和抗肿瘤免疫的作用,这可能是CXCL16-CXCR6轴对胃癌的发展起抑制作用的机制之一。